Utilização da quimera recombinante rErpy-LemA para diagnóstico da leptospirose humana e animal

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Cardoso, Thayná Laner
• Orientador(a): Hartwig, Daiane Drawanz
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso embargado
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pelotas
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Leptospirose; rErpy-LemA; ELISA indireto; Zoonose; Leptospirosis; rErpY-LemA; Indirect ELISA; Zoonosis
• Área do conhecimento CNPq: CIENCIAS AGRARIAS
• Link de acesso: http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/handle/prefix/16358

A leptospirose é uma zoonose mundialmente negligenciada e prevalente em regiões tropicais e países em desenvolvimento, onde condições climáticas e de saneamento precário favorecem a sobrevivência do agente etiológico Leptospira spp.. A doença representa um problema significativo para a saúde pública e animal, com severos impactos econômicos devido a perdas na produção agropecuária e risco de mortalidade em humanos. O Teste de Aglutinação Microscópica (MAT) é o padrãoouro para o diagnóstico da leptospirose, contudo, seu uso apresenta limitações devido à complexidade técnica e aos riscos à segurança dos técnicos de laboratório, principalmente por envolver o manuseio de leptospiras vivas. Diante disso, métodos de diagnóstico mais eficientes, seguros e economicamente viáveis são necessários. Com o presente estudo, objetivou-se desenvolver um ensaio ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) para o diagnóstico da leptospirose em animais e humanos, utilizando como antígeno uma quimera recombinante composta pelas proteínas ErpYlike e LemA (rErpY-LemA) de Leptospira spp.. A quimera rErpY-LemA foi produzida e avaliada como antígeno em ensaios de ELISA com amostras de soro de animais (bovinos, ovinos e equinos) e humanos, previamente avaliados pela MAT. Também foi avaliada a reatividade desta quimera com soros de animais infectados com diferentes sorovares de Leptospira. Como resultados, a quimera apresentou reatividade (P<0,001) com anticorpos gerados contra 13 diferentes sorovares. O ensaio ELISA demonstrou um desempenho diagnóstico promissor em soros de bovinos (n=335), ovinos (n=259) e equinos (n=884), confirmados pelo MAT. Para bovinos foi obtida sensibilidade de 98,3–100% e especificidade de 60,9–78,2%, para ovinos sensibilidade de 97,7–100% e especificidade de 57,1–76,5%, já para equinos sensibilidade de 94,5% e especificidade de 92,07%. Para humanos, o ensaio desenvolvido avaliou a detecção de anticorpos IgM e IgG em 80 soros previamente diagnosticados pelo MAT, abrangendo diferentes fases (aguda, convalescente ou desconhecida). Quando a quimera recombinante foi avaliada com soros humanos na fase convalescente para a detecção de anticorpos IgG, o ensaio ELISA demonstrou sensibilidade e especificidade de 80% e 100%, respectivamente. Soros da fase aguda foram avaliados com a quimera para a detecção de anticorpos IgM, alcançando sensibilidade e especificidade de 95%. Soros de fase desconhecida foram comparados com a quimera para a detecção de anticorpos IgG e IgM. Assim, o ELISA indireto para IgG humana apresentou 100% de sensibilidade, 95% de especificidade, enquanto para os anticorpos IgM foram obtidos 100% de sensibilidade e especificidade. A quimera recombinante rErpY-LemA demonstrou elevado desempenho em ensaios de ELISA, com alta sensibilidade e especificidade para a detecção de anticorpos IgM e IgG em humanos e animais (bovinos, ovinos e equinos). A ampla reatividade com diversos sorovares de Leptospira reforça seu potencial como uma alternativa prática e segura ao MAT, superando suas limitações. Esse ELISA destaca-se como uma ferramenta promissora para o diagnóstico rápido e eficiente da leptospirose em diferentes contextos clínicos e epidemiológicos.