Avaliação do perfil lipídico e proteico e caracterização dos hemócitos da hemolinfa de aranha marrom (Loxosceles intermedia)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2013
Autor(a) principal: Bednaski, Aline Viana
Orientador(a): Ribeiro, Andrea Senff
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Dissertações
Aranha
Hemolinfa
Hemócitos
Citologia e biologia celular
Biologia molecular
Link de acesso: http://hdl.handle.net/1884/31222
Resumo: Orientadora : Profª. Drª. Andrea Senff Ribeiro
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spelling Bednaski, Aline VianaChaim, Olga MeiriUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e MolecularRibeiro, Andrea Senff2018-04-23T18:41:59Z2018-04-23T18:41:59Z2013http://hdl.handle.net/1884/31222Orientadora : Profª. Drª. Andrea Senff RibeiroCo-orientadora : Profª. Drª. Olga Meiri ChaimDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 28/02/2013Bibliografia: f. 83-95Área de concentração: biologia celularResumo: No Paraná, ocorrem apenas quatro espécies de aranhas do gênero Loxosceles: L. gaucho, L. laeta, L. hirsuta e L. intermedia, sendo essa ultima espécie a mais abundante em Curitiba-PR e região metropolitana. Essas aranhas também são conhecidas como aranhas-marrons devido a sua coloração que varia de marrom claro a marrom escuro. Atualmente, acidentes com aranha-marrom é um problema de saúde publica devido aos inúmeros casos de envenenamento. O veneno dessas aranhas já foi caracterizado e diversas toxinas foram estudadas. Contudo, a hemolinfa de Loxosceles nunca foi pesquisada e de forma geral a hemolinfa de artrópodes é pouco investigada. Hemolinfa de diferentes animais tem sido alvo de estudos que envolvem diversas aplicações biotecnológicas, tais inibição de proteases e aplicação dos peptídeos antimicrobianos nas áreas médicas. Portanto, esse trabalho teve como objetivo determinar as características bioquímicas e biológicas da hemolinfa da aranha-marrom L. intermedia. A hemolinfa de L. intermedia apresentou um perfil proteico com amplo espectro de proteínas. O componente proteico mais representativo foi identificado na região de 66 kDa. Alguns autores mostraram que essa região refere-se às subunidades de hemocianina, que é a proteína mais abundante na hemolinfa dos artrópodes. Além disso, o perfil proteico apresentou outras duas bandas bem características da hemolinfa de outros artrópodes em 116 e 97 kDa. O perfil em gel 2D revelou que as proteínas totais da hemolinfa de L. intermedia estão distribuídas principalmente na faixa de pH ácido e neutro. A análise lipídica da hemolinfa foi realizada através de HPTLC e foram identificados fosfolipídios como fosfatidilcolina, fosfatidil-inositol e fostatidiletanolamina. Os esteróis identificados nesse trabalho foram colesterol, ergosterol e triacilglicerol; e não foram identificados glicolipídios. O perfil de glicosilação proteica foi avaliado através de Lectin Blot e as proteínas totais da hemolinfa de L. intermedia apresentaram resíduos de alta manose e N-acetilglucosamina. Não foram identificados resíduos de ácido siálico, corroborando com dados de glicosilação de toxinas do veneno dessa mesma aranha. Através de microscopia de luz foram identificados pró-hemócitos, que são células precursoras dos outros tipos celulares. Também foi constatada a presença de plasmatócitos e granulócitos, que são células envolvidas na imunidade inata, realizando fagocitose, nodulação, encapsulação e melanização. Esse trabalho foi o primeiro a estudar a hemolinfa da aranha-marrom caracterizando o perfil proteico, lipídico e de glicosilação de seus componentes. Além disso, a fração celular também foi investigada e diferentes hemócitos identificados. Dessa forma esse estudo inicia uma nova linha de pesquisa no estudo de Loxosceles, ampliando o conhecimento e as fontes naturais de moléculas bioativas com potenciais biotecnológicos.Abstract: In Paraná there are only four species of Loxosceles spiders: L. gaucho, L. laeta, L. hirsuta e L. intermedia, being the last one more abundant in Curitiba and metropolitan region. Loxosceles spiders are commonly known as brown spiders regarding their body color which ranges from a fawn to dark brown. The current increasing number of envenomations after brown spider accidents is a problem of public health. Venom from these spiders has already been characterized and a great number of toxins have been studied. However, Loxosceles hemolymph has never been investigated; and in general, hemolymph from arthropods are poorly studied. Hemolymphs from distinct animals have been focus of studies concerning biotechnology applications, such as inhibition of proteases and application of the antimicrobial peptides in the medical. Thus, this work aimed the determination of biochemical and biological characteristics of the hemolymph from L. intermedia brown spider. The protein profile of L. intermedia hemolymph presented a broad range of proteins. The major proteic component was detected at 66 kDa region. Some authors showed that this region is rich in hemocyanin subunits and that this protein is the most abundant component in arthropods hemolymph. Furthermore, the protein profile depicted two other bands, which are hallmarks in other arthropods hemolymph, in 116 and 97 kDa. The bidimensional protein profile showed that hemolymph proteins from L. intermedia are mainly distributed among acid to neutral pH. Lipid analysis was performed by HPTLC technique and several phospholipids were identified, such as phosphatidylcholine, phosphatidylinositol and phosphatidylethanolamine. Sterols identified in this work were cholesterol, ergosterol and triacylglycerol, and no glycolipids were identified. Protein glycosylation profile was evaluated by Lectin Blot assays and only high manose and N-acetylglucosamine residues were identified. Sialic acid residues were not found, corroborating with L intermedia glycosylation data obtained using venom toxins. Using light microscopy analysis, phohemocytes were identified, which are the precursor cells. Plasmatocytes and granulocytes were also detected, these cells are involved in innate immunity, acting in phagocytosis, nodulation, encapsulation and melanization. This work was the first one to study the brown spider hemolymph, characterizing the protein, lipid and glycosilation profiles of its components. Furthermore, the cellular fraction was also investigated and different hemocytes were identified. Thereby, this study starts a new research line in Loxosceles field, extending the knowledge and the natural source of bioactive molecules with biotechnological potentials.96 f. : il. algumas color., tabs.application/pdfDisponível em formato digitalDissertaçõesAranhaHemolinfaHemócitosCitologia e biologia celularBiologia molecularAvaliação do perfil lipídico e proteico e caracterização dos hemócitos da hemolinfa de aranha marrom (Loxosceles intermedia)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - ALINE VIANA BEDNASKI.pdfR - D - ALINE VIANA BEDNASKI.pdfapplication/pdf2304268https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/31222/1/R%20-%20D%20-%20ALINE%20VIANA%20BEDNASKI.pdfd50adc130b60a3be319dd359fc252ac9MD51open access1884/312222018-04-23 15:41:59.552open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/31222Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082018-04-23T18:41:59Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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