Efeitos do antibiótico aminoglicosídeo gentamicina em células tubulares renais (MDCK-C11)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2012
Autor(a) principal: Coutinho, Anna Gabrielle Gomes
Orientador(a): Tararthuch, Ana Lucia, 1963-
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Teses
Gentamicina
Celulas
Rins
Fisiologia
Link de acesso: https://hdl.handle.net/1884/28576
Resumo: Orientadora : Profa. Dra. Ana Lúcia Tararthuch
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spelling Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em FisiologiaTararthuch, Ana Lucia, 1963-Coutinho, Anna Gabrielle Gomes2022-12-13T19:47:35Z2022-12-13T19:47:35Z2012https://hdl.handle.net/1884/28576Orientadora : Profa. Dra. Ana Lúcia TararthuchDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa: Curitiba, 29/08/2012Bibliografia: fls. 53-58Area de concentração: FisiologiaResumo: Há muito já se sabe que o antibiótico aminoglicosídeo gentamicina é capaz de provocar danos em células renais. Em células tubulares proximais, receptores de membrana promovem a endocitose da gentamicina, a qual desestabiliza a membrana dos lisossomos. Esta desestabilização da membrana lisossomal está ligada com o fenômeno de apoptose. Além do mais, a gentamicina é capaz de ativar receptor sensível a cálcio (CaSR), presente na membrana apical da célula tubular, o qual tem sido associado com morte celular. Dentre os poucos achados existentes sobre a ação de aminoglicosídeos em células renais distais, sabe-se da participação de receptores de membrana do tipo TRPV (receptores de cátion não seletivos), os quais são capazes de interferir na captação da gentamicina. O objetivo do presente trabalho foi determinar a ação da gentamicina sobre cultura de células do ducto coletor renal (MDCK C11), com a finalidade de se estabelecer seus efeitos sobre as concentrações de cálcio intracelular [Ca2+]i; sobre o pHi; sobre a viabilidade celular através de modificações da integridade da membrana e a citotoxicidade celular gerada pelo antibiótico. Alterações na [Ca2+]i e no pHi foram determinadas utilizando-se microscopia de fluorescência. A velocidade de acidificação das células MDCK C11 quando expostas à gentamicina, foi maior do que quando expostas à solução sem sódio (0,0077±0.0005 unidades de pH/segundo e 0,0031 ± 0,0003 unidades de pH/segundo, respectivamente). Estes resultados sugerem que a gentamicina poderia provocar algum efeito sobre os mecanismos extrusores de prótons. A [Ca2+]i aumentou gradativamente quando as células foram expostas à gentamicina por 10, 20 e 30 minutos e de forma mais intensa quando comparado ao aumento provocado pelo gadolíneo. A presença de Ca2+ no meio extracelular mostrou-se necessária para estimular o aumento da [Ca2+]i induzido pela gentamicina, uma vez que utilizando-se EGTA (quelante de cálcio extracelular), este estímulo desaparece. Porém, na presença de cálcio alto no meio extracelular, o efeito da gentamicina foi abolido, indicando uma possível competição entre cálcio e o antibiótico. Adicionando-se um quelante de cálcio de estoques intracelulares (tapsigargina), o aumento do [Ca2+]i provocado pela gentamicina permaneceu, demonstrando que é possível que este aminoglicosídeo seja capaz de estimular a entrada de cálcio por outras vias que não a do CaSR. Com Microscopia Eletrônica de Varredura, foram observadas modificações morfológicas do epitélio celular exposto ao antibiótico. Através de experimentos medindo a absorbância do corante vermelho neutro, foi demonstrado que a gentamicina diminui a capacidade endocítica da membrana das células. Ainda, com o método do MTT (Thyazolyl Blue Tetrazolium Bromide), foi possível observar um aumento da atividade mitocondrial provocada pelo antibiótico.Abstract: It is well known that the aminoglycoside antibiotic gentamicin is capable of causing damage to kidney cells. In proximal tubular cells, membrane receptors promote endocytosis of gentamicin, which destabilizes the membrane of lysosomes. This destabilization of the lysosomal membrane is connected with the phenomenon of apoptosis. Moreover, gentamicin is able to activate the calcium sensitive receptor (CaSR) present in the apical membrane of tubular cell, which has been associated with cell death. Among the few existing findings about the effect of aminoglycosides in distal renal cells, it is known the participation of membrane receptors like TRPV (non-selective cation receptors), which are capable of interfering in the uptake of gentamicin. The objective of this study was determine the action of gentamicin on cultured cells of the kidney collecting duct (MDCK C11), in order to establish their effects on intracellular calcium concentrations [Ca2+]i; on intracellular pH (pH)i, and cell viability through modifications of membrane integrity and cellular cytotoxicity generated by the antibiotic. Changes in [Ca2+]I and pHi was determined using fluorescence microscopy. The rate of acidification of MDCK C11 cells when exposed to gentamicin was higher than when exposed to the solution without sodium (0.0077 ± 0.0005 pH units/second and 0.0031 ± 0.0003 pH units/second, respectively). These results suggest that gentamicin could cause some effect on proton extrusion. The [Ca2+]i gradually increased when cells were exposed to gentamicin for 10, 20 and 30 minutes and more intensively as compared to the increase caused by gadolinium. The presence of extracellular Ca2+ was found to be necessary to stimulate the increase in [Ca2+]i induced by the gentamicin, since using EGTA (extracellular calcium chelator), this stimulus disappeared. However, in the presence of high calcium in the extracellular environment, the effect of gentamicin was abolished, suggesting a possible competition between calcium and the antibiotic. Adding a drug that deplates intracellular Ca2+ stores (thapsigargin), the increase in [Ca2+]i induced by the gentamicin remained, demonstrating that it is possible that this aminoglycoside is able to stimulate the influx of calcium by other routes different than the CaSR. With scanning electron microscopy, morphological changes were observed in epithelial cell exposed to the antibiotic. Through experiments by measuring the absorbance of the dye neutral red, it was demonstrated that gentamicin diminishes endocytic ability of cell membrane. Furthermore, with the MTT method (Thyazolyl Blue Tetrazolium Bromide), it was observed an increase in mitochondrial activity caused by the antibiotic.58f. : il. [algumas color.], grafs., tabs.application/pdfDisponível em formato digitalTesesGentamicinaCelulasRinsFisiologiaEfeitos do antibiótico aminoglicosídeo gentamicina em células tubulares renais (MDCK-C11)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - ANNA GABRIELLE GOMES COUTINHO.pdfapplication/pdf4419354https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/28576/1/R%20-%20D%20-%20ANNA%20GABRIELLE%20GOMES%20COUTINHO.pdf1c4c49633073ee6e99dd6d92523d697bMD51open accessTEXTR - D - ANNA GABRIELLE GOMES COUTINHO.pdf.txtExtracted Texttext/plain95368https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/28576/2/R%20-%20D%20-%20ANNA%20GABRIELLE%20GOMES%20COUTINHO.pdf.txtae2042f93a604abd993e61935b8876d0MD52open accessTHUMBNAILR - D - ANNA GABRIELLE GOMES COUTINHO.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1427https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/28576/3/R%20-%20D%20-%20ANNA%20GABRIELLE%20GOMES%20COUTINHO.pdf.jpgcb8855133cf72ac03e051668fbf6d1f2MD53open access1884/285762022-12-13 16:47:36.037open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/28576Repositório InstitucionalPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestinformacaodigital@ufpr.bropendoar:3082022-12-13T19:47:36Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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