Seleção de isolados de Macrophomina phaseolina produtores de hidrolases e purificação parcial de complexos enzimáticos lipolíticos através de fracionamento com espuma

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Schinke, Cláudia
• Orientador(a): Germani, Jose Carlos
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Microbiologia industrial; Fungos; Enzimas : Purificacao; Fracionamento; Lipase
• Palavras-chave em Inglês: Enzymes; Radial growth rate; Lipolytic activity; Foam fractionation
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/258370

Macrophomina phaseolina, fungo filamentoso fitopatogênico pertencente ao filo Ascomycota, apresenta ampla distribuição geográfica em climas quentes e secos. No Brasil, é encontrado do Nordeste até o Sul. Por causar sérias perdas na produção agrícola, é bastante estudado visando descobrir e combater seus mecanismos de patogenicidade. Porém, muito pouco se conhece quanto à sua capacidade para produzir biomoléculas – mais especificamente, enzimas - de potencial uso industrial. Treze isolados de M. phaseolina, coletados em diversas regiões brasileiras, foram cultivados em meio semi-sólido contendo diferentes substratos para determinar sua velocidade de crescimento radial e verificar a produção de hidrolases pectinolíticas, amilolíticas, proteolíticas e lipolíticas, com o objetivo de identificar aquele(s) de rápido crescimento em cada substrato e produtores da correspondente hidrolase. Dez isolados produziram todas as hidrolases verificadas. A velocidade de crescimento sobre pectina cítrica foi significativamente mais alta (p < 0,05) e a velocidade de crescimento sobre os diferentes substratos permitiu selecionar CMM 2105, CMM 1091 e PEL como os isolados de rápido crescimento sobre todos os substratos. A atividade lipolítica específica do isolado PEL, determinada a 37 ⁰C pH 8, foi significativamente mais elevada na comparação com outros três isolados após 96 h de cultivo em meio líquido contendo azeite de oliva, indicando o potencial de seus complexos lipolíticos para uso em detergentes fracamente alcalinos. O cultivo de CMM 2105, MMBF 0410 e PEL em meio líquido contendo azeite de oliva, sob diferentes pH, temperatura e tempo de incubação, indicou que MMBF 0410 apresentou a mais elevada atividade lipolítica e as melhores condições de cultivo foram 30 ⁰C, pH 5,5, com 72 h de incubação. Porém, quando MMBF 0410 foi cultivado sob as melhores condições em meio líquido contendo Tween 80, mostrou atividade lipolítica menor. A atividade dos caldos foi testada a 45 ⁰C, pH 8, por 30 min, evidenciando o potencial uso dos complexos lipolíticos em detergentes fracamente alcalinos em temperaturas médias. O sobrenadante de caldo de cultivo de MMBF 0410 em meio líquido contendo Tween 80 foi submetido ao fracionamento com espuma utilizando ar sob vários fluxos em estágios e adição escalonada de Triton X-100. As frações de espumado mais concentradas em complexos enzimáticos lipolíticos apresentaram atividade a 45 ⁰C, pH 8, recuperação e enriquecimento da atividade lipolítica de 45 % e 34,7, respectivamente, e purificação de 2,9. Foram detectadas lipases no espumado.