Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2013
Autor(a) principal: Purificação, Marcela
Orientador(a): Terenzi, Hernán Francisco
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Florianópolis, SC
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Link de acesso: http://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/103214
Resumo: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia
id UFSC_26885f4cb32fd6f5c5a2f3e7ab2d960b
oai_identifier_str oai:repositorio.ufsc.br:123456789/103214
network_acronym_str UFSC
network_name_str Repositório Institucional da UFSC
repository_id_str
spelling Universidade Federal de Santa CatarinaPurificação, MarcelaTerenzi, Hernán FranciscoVillarino, Andrea2013-07-16T03:34:41Z2013-07-16T03:34:41Z2013-07-16T03:34:41Z249429http://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/103214Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em BiotecnologiaProteínas tirosina-fosfatases (PTPs) de diversos microrganismos possuem importantes papéis na determinação da patogenicidade por modificação do equilíbrio entre fosforilação/defosforilação dentro do hospedeiro. Deste modo, a identificação de substratos das PTPs torna-se um passo essencial para compreensão de seus papéis fisiológicos, e também contribuem para o desenvolvimento de novos fármacos. Neste trabalho, a metodologia de 'mutant substrate-trapping' foi utilizada como ferramenta para identificação de potenciais substratos fisiológicos de PtpA, uma das duas únicas tirosina-fosfatases presentes em Mycobacterium tuberculosis. A mutação do Asp126 no sítio ativo de PtpA converteu uma enzima ativa em um 'mutant substrate-trapping': PtpA-D126A. Ambas as enzimas, ativa/não mutada ('wild-type' - wt) e mutante D126A, foram purificadas e caracterizadas por estudos cinéticos e estruturais. O mutante D126A mostrou ser uma boa ferramenta para 'mutant substrate-trapping', apresentando valor de Km semelhante à proteína ativa, todavia com Vmax reduzido, mantendo os possíveis substratos mais tempo unidos ao seu sítio ativo. Para identificar prováveis substratos de PtpA, ensaios in vitro foram realizados, por incubação de PtpA-D126A com diferentes extratos de macrófagos humanos da linhagem THP-1. Os experimentos foram realizados na escala de Ressonância Plasmônica de Superfície e posteriormente passados a miligramas de proteína. Os complexos PTP-substrato foram isolados por imobilização covalente da PtpA-D126A à resina de agarose e analisados por SDS-PAGE. A identificação por espectrometria de massa dessas proteínas, bem como das proteínas de E. coli co-eluídas com PtpA-D126A durante cromatografias de afinidade e exclusão molecular, revelou alguns possíveis substratos de PtpA. Outros ensaios estão programados para confirmação dos resultados e identificação de substratos fisiológicos da proteína tirosina-fosfatase PtpA de M. tuberculosis.81 f.| il., grafs., tabs.porFlorianópolis, SCBiotecnologiaMycobacterium tuberculosisIdentificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINAL249429.pdfapplication/pdf3363259https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/103214/1/249429.pdf38f8dd99b759ea476f6268236b2e2462MD51123456789/1032142013-07-16 00:34:41.607oai:repositorio.ufsc.br:123456789/103214Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestsandra.sobrera@ufsc.bropendoar:23732013-07-16T03:34:41Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
dc.title.en.fl_str_mv Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
title Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
spellingShingle Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
Purificação, Marcela
Biotecnologia
Mycobacterium tuberculosis
title_short Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
title_full Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
title_fullStr Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
title_full_unstemmed Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
title_sort Identificação de potenciais substratos de PTPA, tirosina-fosfatase de Mycobacterium tuberculosis
author Purificação, Marcela
author_facet Purificação, Marcela
author_role author
dc.contributor.en.fl_str_mv Universidade Federal de Santa Catarina
dc.contributor.author.fl_str_mv Purificação, Marcela
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Terenzi, Hernán Francisco
dc.contributor.advisor-co1.fl_str_mv Villarino, Andrea
contributor_str_mv Terenzi, Hernán Francisco
Villarino, Andrea
dc.subject.classification.en.fl_str_mv Biotecnologia
Mycobacterium tuberculosis
topic Biotecnologia
Mycobacterium tuberculosis
description Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia
publishDate 2013
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2013-07-16T03:34:41Z
dc.date.available.fl_str_mv 2013-07-16T03:34:41Z
dc.date.issued.fl_str_mv 2013-07-16T03:34:41Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/103214
dc.identifier.other.en.fl_str_mv 249429
identifier_str_mv 249429
url http://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/103214
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 81 f.| il., grafs., tabs.
dc.publisher.none.fl_str_mv Florianópolis, SC
publisher.none.fl_str_mv Florianópolis, SC
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFSC
instname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)
instacron:UFSC
instname_str Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)
instacron_str UFSC
institution UFSC
reponame_str Repositório Institucional da UFSC
collection Repositório Institucional da UFSC
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/103214/1/249429.pdf
bitstream.checksum.fl_str_mv 38f8dd99b759ea476f6268236b2e2462
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)
repository.mail.fl_str_mv sandra.sobrera@ufsc.br
_version_ 1851758834383585280

Registros relacionados