Perfil de expressão dos genes MYC, MYCN, TERT, ASPM e PRAME em Meduloblastoma

• Ano de defesa: 2010
• Autor(a) principal: Vulcani-Freitas, Tânia Maria [UNIFESP]
• Orientador(a): Toledo, Silvia Regina Caminada de [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001qxt8
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: MYC; MYCN; TERT; ASPM; PRAME; Meduloblastoma- Expressão gênica; medulloblastoma; TERT and gene expression
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9928

Meduloblastoma (MB) é o tumor maligno de sistema nervoso central (SNC) mais comum em criança, compreendendo 20% dos tumores primários de SNC e 40% dos tumores cerebelares da infância. Devido sua forte tendência metastática, o tratamento padrão pós-operatório inclui radio e quimioterapia, cujo impacto causa distúrbios endócrinos e de crescimento, e disfunção neurocognitiva a longo prazo. Frente a esses efeitos negativos, muitas pesquisas em meduloblastoma têm sido realizadas com intuito de obter conhecimento biológico desses tumores para tentar identificar fatores prognósticos moleculares que possam orientar os tratamentos, tornando-os mais específicos e menos agressivos. Alguns estudos em MB têm sugerido que a expressão do oncogene MYC está associada com diminuição da sobrevida e sua superexpressão com maior agressividade do tumor. Por isso, MYC pode ser um indicador importante de prognóstico, além de modulador do comportamento desta doença. Enquanto o gene MYC é expresso em uma variedade de tecidos, a expressão de MYCN, outro membro da família MYC, é restrita a estágios precoces do desenvolvimento embrionário de alguns tecidos apenas, entre eles, o sistema nervoso central e periférico, sendo um mediador importante dos efeitos de ativação na proliferação de células precursoras cerebelares. Dessa forma, quando a expressão de MYCN está desregulada, ela aumenta a tumorigenicidade dessas células podendo dar origem ao MB. Além disso, o gene MYC também é considerado importante regulador da transcrição TERT, gene que codifica uma subunidade catálica de da telomerase, enzima importante para carcinogênese e imortalização de células neoplásicas. A atividade anormal da telomerase está presente em 90% dos cânceres e o aumento de sua atividade está associado a eventos clínicos desfavoráveis. Outro gene importante é o ASPM (abnormal spindle-like microcephaly associated) que desempenha função fundamental na neurogênese e proliferação celular durante o desenvolvimento cerebral. Esse gene codifica uma proteína de centrossomo e fuso mitótico que permite a divisão celular simétrica em células neuroepiteliais durante o desenvolvimento e aumento do tamanho cerebral. Alterações em ASPM é a causa mais comum de microcefalia primária em humanos e de falha de segregação, induzindo a aneuploidias e instabilidade genética. Além desses genes, outro gene estudado recentemente, como alvo em xv imunoterapia, é o gene PRAME que codifica um antígeno tumoral que está presente em vários tumores, incluindo meduloblastoma. O gene PRAME possui baixa ou ausência de expressão em tecidos normais, por isso é pode ser um forte candidato como alvo em imunoterapia, que é um tratamento menos tóxico. OBJETIVOS: O objetivo desse estudo foi investigar a expressão dos genes MYC, MYCN, TERT, ASPM e PRAME em fragmentos tumorais de meduloblastoma de crianças e tentar correlacionar com os parâmetros clínicos e verificar se há correlação de MYC, MYCN, TERT entre si, uma vez que estão correlacionados. MÉTODOS: Análise de expressão gênica foi realizada através de PCR quantitativa em tempo real, utilizando sistema SYBR Green, em 37 amostras tumorais de crianças, com média de idade de 8 anos. Para comparação de perfil de expressão foi usada duas amostra de cérebro normal. A análise estatística foi realizada nos programas Graph Pad Prism 4 e VassarStats RESULTADOS: Todas nossas amostras superexpressaram o gene MYCN com valor de quantificação relativa (RQ) mediana igual a 31 com p=0.001; assim como, todas nossas amostras também superexpressaram o gene ASPM com mediana igual a 586, p<0.0001. Do total de amostras, 95%, 81% e 84% superexpressaram TERT, MYC e PRAME respectivamente, sendo os valores de RQ (mediana) iguais a 322, p=0.01; 9.2, p<0.0001; 33, p<0.0001. Apesar da elevada expressão dos genes estudados na maioria das amostras estudadas, houve apenas correlação estatística entre a superexpressão de MYCN (p=0.008) e os pacientes que foram a óbito, e de TERT e os pacientes que recidivaram (p=0.0431). Não encontramos outra correlação estatística entre a superexpressão dos genes e as características clínicas dos pacientes. CONCLUSÃO: Os genes MYC, MYCN e TERT estavam superexpressos nas amostras de meduloblastoma analisadas em uma freqüência muito superior ao demonstrado na literatura, o que sugere que esses três genes podem ajudar na identificação de tumores agressivos, uma vez que o pognóstico desses pacientes continua baseado apenas em parâmentros clínicos. A superexpressão de ASPM em todas as amostras estudadas sugere que este gene pode estar envolvido na origem de MB, como parte da neurogênse anormal durante o desenvolvimento embrionário, porém estudoas funcionais devem ser realizados para confirmar essa hipótese. Por fim, o gene PRAME pode ser candidato à marcador de célula tumoral em MB, podendo no futuro ser candidato como alvo em imunoterapias.