Glipicam-1 no glioblastoma humano: implicações na tumorigênese e na quimioterapia

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Listik, Eduardo [UNIFESP]
• Orientador(a): Toma, Leny [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001ht61
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Glioblastoma; Glipicam-1; Tumorigênese; Resistência À Quimioterapia; Temozolomida
• Palavras-chave em Inglês: Glioblastoma; Glipicam-1; Tumorigenesis; Resistance To Chemotherapy; Temozolomide
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7777956; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59718

Introdução: O glioblastoma é um dos tumores cerebrais malignos mais comuns, em que os pacientes possuem uma sobrevida média de 24 meses. A literatura científica revelou evidências de que o glipicam-1 é superexpresso no glioblastoma humano e está negativamente correlacionado com a sobrevivência desses pacientes. O glipicam-1 é um proteoglicano de heparam sulfato de membrana, cujas cadeias de heparam sulfato são classicamente conhecidas por se associar a morfógenos, frequentemente associados ao câncer. Objetivo: Este estudo tem como objetivo investigar como o glipicam-1 influencia o perfil tumoral no glioblastoma humano por meio de modelos com linhagens celulares in vitro. Métodos: O glipicam-1 foi silenciado das células U-251 MG utilizando um shRNA específico, seguido de uma seleção clonal. Os efeitos do silenciamento foram avaliados pela análise de discrepâncias transcricionais avaliadas por meio de RTqPCR, bem como por outras técnicas, como citometria de fluxo, atividade metabólica, migração, proliferação, adesão, e clonogenicidade celulares; e ensaio de susceptibilidade à temozolomida. A microscopia confocal foi empregada para investigar a localização de glipicam-1 em balsas lipídicas ou sua associação com sindecam-4 e glipicam-3. Resultados: O glipicam-1 mostrou estar associado à expressão de outros proteoglicanos de heparam sulfato e determinadas metaloproteases. Pelo silenciamento de glipicam-1, a taxa de crescimento celular foi reduzida em até 71% e a proliferação em 54%, sendo que os clones celulares indicaram estar preferencialmente na fase G0 do ciclo celular em vez de G1. A migração celular foi severamente afetada pela depleção do proteoglicano. Células U-251 MG aderiram mal à laminina, mas tiveram alta afinidade ao colágeno do tipo IV e à vitronectina. No entanto, o glipican-1 apenas influenciou diretamente a afinidade de ligação das células U-251 MG à laminina, embora uma cinética de adesão mais lenta foi observada mediante o knock-down. Glipicam-1 revelou ser altamente prevalente nas células de glioblastoma, primariamente residindo na membrana celular e em vesículas extracelulares, ocasionalmente associado ao glipicam-3. O glipicam-1 também pôde ser identificado em junções célula-célula juntamente com sindecam-4, mas não foi identificado em balsas lipídicas neste estudo. Este proteoglicano também revelou indícios de ser um potencial mediador dos mecanismos de resistência à temozolomida no glioblastoma, uma vez que células silenciadas para glipicam-1 foram mais susceptíveis a este agente alquilante em relação à linhagem controle U-251 MG. Conclusão: Neste trabalho, apresentamos dados que evidenciam a importância do glipicam-1 como uma macromolécula fundamental no microambiente tumoral do glioblastoma humano, e que também representa um alvo terapêutico promissor para este tumor altamente maligno.