Perfil transcricional e proteômico de leveduras de P. brasiliensis presentes em lesões granulomatosas crônicas de camundongos C57BL/6

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Borges, Bruno Montanari [UNIFESP]
• Orientador(a): Loures, Flávio Vieira [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Paracoccidioidomicose; Granuloma; Transcriptoma; Proteoma; Vesículas extracelulares
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/11600/69155

Granulomas são estruturas imunológicas envolvidas na defesa de hospedeiros contra o fungo Paracoccidioides brasiliensis, principal agente etiológico da Paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica granulomatosa endêmica na América Latina. Estudos com transcritos em lesões granulomatosas podem revelar importantes genes que atuam no granuloma, permitindo uma melhor compreensão de mecanismos da relação fungo-hospedeiro. Igualmente, um proteoma das leveduras granulomatosas e estudos das vesículas extracelulares (EVs) produzidas por esses fungos podem apontar importantes mecanismos de virulência expressos sob as condições de estresse resultantes da atividade do sistema imunológico no granuloma. Portanto, camundongos C57BL/6 foram infectados com leveduras do P. brasiliensis e após 8 e 12 semanas de infecção, as lesões granulomatosas foram obtidas e o RNA fúngico e murino extraídos. Proteínas fúngicas também foram obtidas. Ademais, leveduras presentes nas lesões foram posteriormente cultivadas e submetidas a outro ensaio proteômico e à extração de suas EVs, as quais foram utilizadas no desafio de macrófagos e células dendríticas, e no estudo da resposta adaptativa celular desenvolvida por linfócitos em cocultivo com as células inatas. Os transcritos evidenciaram atividade gênica relaciona a neutrófilos, macrófagos e linfócitos, além de uma resposta Th1/Th17 presente nas lesões. Transcritos para o CTLA-4, PD-1 e arginase-1, evidenciam a ação de mecanismos regulatórios. Os transcritos fúngicos apontam para um aumento da produção de sideróforos para captura de ferro, mecanismo de virulência fúngico nunca observado em granulomas. Adicionalmente, transcritos e proteoma apontam para uma repressão da atividade fúngica dentro do granuloma. Contudo, foi visto que após o cultivo dessas leveduras extraídas das lesões granulomatosas o metabolismo do fungo foi induzido, apresentando maior abundância de proteínas relacionadas ao metabolismo energético e fatores de virulência, mostrando que após a passagem do fungo pelo granuloma a virulência é aumentada, confirmação feita por ensaios de sobrevida. Além disso, foi visto pelo proteoma das EVs que elas auxiliam na indução do metabolismo e virulência fúngica, sendo capazes inclusive de modular uma resposta imunológica. Do fato, em resposta às EVs, células apresentadoras de antígeno tiveram menor ativação quando comparado ao estímulo dado por EVs controles. Ademais, as EVs do fungo recuperado do granuloma induziram respostas adaptativas do tipo Th1/Tc1, Th2/Tc2 e Th17/Tc17 mais exacerbadas, além de induzirem uma maior frequência de linfócitos T regulares, mostrando pela primeira vez a capacidade de EVs fúngicas em modular uma resposta adaptativa celular.