Papel do receptor aril-hidrocarboneto na atividade imunomoduladora das células-tronco mesenquimais utilizando um modelo de lesão renal aguda

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Evangelista, Laura Sibele Martins [UNIFESP]
• Orientador(a): Almeida, Danilo Candido De [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002pmj0
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Célula-Tronco Mesenquimal; Receptor Aril-Hidrocarboneto; Imunomodulação E Lesão Renal Aguda.
• Palavras-chave em Inglês: Mesenchymal Stem Cell; Aryl-Hydrocarbon Receptor; Immunomodulation And Acute Renal Injury.
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=9099905; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/60033

A lesão renal aguda (LRA) é uma doença que afeta milhões de pessoas ao redor do mundo possuindo uma alta mortalidade. A LRA possui como bases fisiopatológicas a inflamação a qual é caracterizada pelo influxo de células inflamatórias. O receptor aril-hidrocarboneto (AhR) é um fator de transcrição presente em várias células e em células inflamatórias infiltrantes, estando envolvido principalmente na regulação de diversos processos biológicos incluindo a resposta imune. Nesse contexto, as células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem um grande potencial imunoterapêutico, o qual pode ser regulado por receptores específicos como o AhR. Os efeitos precisos da ativação do AhR em MSCs, assim como o seu papel terapêutico em patologias específicas como a doença renal aguda ainda permanece pobremente elucidado. Portanto, neste presente trabalho, nós avaliamos a ativação do AhR nas MSCs e funcionalmente testamos sua terapêutica em um modelo experimental de lesão renal aguda induzido por cisplatina (15mg/kg, CEUA: 9656080916). As MSCs foram derivadas do tecido adiposo de camundongos, expandidas em culturas e ativadas com quenurenina (KY, 50μM) ou tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD, 0.2μM), indutores naturais e sintéticos do AhR, respectivamente. Ao final de 4 dias após indução da lesão citotóxica, soro e tecidos renais foram coletados para diversas analises (colorimétricas, RT-PCR, citometria de fluxo, imuno-histoquímicas e analises histopatológicas). Primeiro, observamos que as MSCs foram perfeitamente ativadas pelo AhR e expressaram, de maneira dose-dependente, altos níveis dos genes responsivos e moléculas acessórias a ativação do AhR (CYP1b1, AhR e ARNT), além de apresentarem uma elevada cinética em cultura (>Ki-67). Em seguida, foi detectado que ambos os tratamentos com MSCs (normais e estimuladas com KY), similarmente, protegeram os animais da LRA apresentando menor perda de peso, baixos índices de creatinina e ureia sérica, preservada arquitetura renal, apoptose reduzida (caspase-3) e baixa inflamação tecidual (IL-6, CCL2 e TNF-α). Adicionalmente, de forma específica, nós analisamos monócitos/macrófagos teciduais renais (células CD68) e verificamos menor frequência cumulativa em camundongos tratados com as MSCs normais. Os macrófagos renais (F4/80+CD11b+) do grupo que recebeu a infusão de MSCs normais também apresentaram um perfil mais imunoregulador com baixa expressão de marcadores inflamatórios M1 (CCL2 e STAT3) e aumento de marcadores anti-inflamatórios M2 (CD206, FIZZ1 e CX3CR1). Finalmente investigamos a expressão de genes associados ao metabolismo tecidual renal e foi constatado que os rins dos animais administrados com MSCs normais apresentaram um perfil menos glicolítico (baixo HK2 e PK), enquanto os rins de animais que receberam MSCs estimuladas com KY tiveram a via da β-oxidação hiper-regulada (elevado CPTA2 e ACOX1). Em suma, nós demostramos que as MSCs podem ser estimuladas por KY via AhR e que essa sensibilização afetou parcialmente as atividades imunoregulatórias das MSCs em macrófagos utilizando um modelo de LRA induzido por cisplatina, mas não afetou sua renoproteção. Esperamos que esses resultados possibilitem o melhor entendimento dos mecanismos associados a ativação das MSCs e sua aplicação em diversas patologias inflamatórias, facilitando assim, uma melhor translação terapêutica para a prática clínica.