Estudo da ação da osteopontina na inibição da expressão genica do cotransportador de sódio-fosfato NPT2A

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Chiarantin, Gabrielly Maria Denadai [UNIFESP]
• Orientador(a): Barros, Nilana Meza Tenório de [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001gbst
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: NPT2A; Cotransportador de sódio-fosfato; Osteopontina; XLH; PHEX
• Palavras-chave em Inglês: NPT2A; Sodium-phosphate cotransporter; Osteopontin; XLH; PHEX
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=1644100; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47390

A Hipofosfatemia Ligado ao Cromossomo X (XLH) é a forma mais prevalente de raquitismo hereditário nos seres humanos, ocorrendo por consequência de mutações no gene PHEX (Phosphate- regulating gene with homologies to endopeptidase on the X chromosome). A XLH é caracterizada pelo retardo do crescimento, raquitismo e osteomalacia. Associado com a XLH estão os defeitos na reabsorção renal de fosfato e no metabolismo da vitamina D, causando hipofosfatemia. Em estudos in vitro e in vivo, tem sido mostrado que na ausência da PHEX há um acúmulo de um fator circulante que reduz a mineralização óssea pela inibição do cotransportador de sódio-fosfato NPT2A, o qual medeia à reabsorção do fosfato nos rins. Recentemente, nosso grupo demonstrou que a osteopontina (OPN) é um substrato fisiológico para PHEX, e que esta inativação promove a mineralização óssea. No entanto, quando a PHEX está deficiente no osso do Hyp mouse, a OPN e seus fragmentos se acumulam, inibindo localmente a mineralização na matriz extracelular. No presente estudo, investigamos se a OPN e seus fragmentos (peptídeos ASARM) afetam a expressão de NPT2A. Utilizando o sobrenadante de uma cultura celular de osteosarcoma humano com a expressão de PHEX silenciada (MG-63 shRNA-PHEX), mostramos que na ausência de PHEX, um fator secretado no sobrenadante da MG-63 diminuiu a expressão de RNAm e a expressão proteica do NPT2A em células renais (HK- 2). Com base nesta observação e no fato de que a OPN é eficientemente degradada pela PHEX, foram investigados os efeitos de OPN exógena e o seus peptídeos ASARM na expressão do NPT2A em células HK-2. O RT-PCR mostrou que a OPN e seus peptídeos ASARM diminuíram significativamente a expressão do NPT2A. Estes resultados fornecem uma nova visão de fatores humorais circulantes.