Influência dos agentes de transfecção na marcação de células tronco com nanopartículas para seu posterior rastreamanto na terapia celular no modelo animal de avc

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Reis, Rafael Ferreira dos [UNIFESP]
• Orientador(a): Contreras, Lionel Fernel Gamarra [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Nanopartículas; Óxido ferroso-férrico; Protamina; Células-tronco; Transfeção
• Palavras-chave em Inglês: Nanoparticle; Ferrous oxide; Protamine; Stem cell; Transfection
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3907119; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47344

Objetivo: Elucidar o processo de transfecção de nanopartículas superparamagnéticas de óxido de ferro (NOF) com agentes de transfecção (AT) em células tronco mesenquimais (CTM) in vitro para monitoramento de transplante de células in vivo em modelo de acidente vascular cerebral (AVC), com perspectiva futura de aplicação de rastreamento terapêutico de transplante de CTM. Para tanto, utilizou-se NOF a base de dextrana e quitosana (NOF-Dx e NOF-Qt, respectivamente) conjugadas com poli-l-lisina (PLL) e sulfato de protamina (SP). Métodos: Para o processo de marcação celular, foram testados PLL e SP em diferentes concentrações conjugadas com diferentes concentrações de NOF-Dx e NOF- Qt em CTM isoladas de medula óssea (MO). Foi avaliada a capacidade estabilidade das NOF em meio aquoso, em relação ao seu tamanho hidrodinâmico temporalmente. A análise do perfil de marcação celular foi avaliada com azul de prussia. Posteriormente foi realizado potencial zeta do complexo NOF-AT, toxicidade, caracterização relaxométrica por imagem de ressonância magnética (IRM) e o teor de íons de ferro em CTM. Estudos em modelo animal de AVC avaliaram o potencial de detecção de CTM marcadas com NOF por IRM de 3 Tesla na área lesada, visando o rastreamento de terapia celular. Resultados: Inicialmente, demonstramos que as NOF-Dx são estáveis em meio de cultura RPMI e na concentração de 10 ?gFe/mL. Através da coloração de azul de prússia foi observado que as NOFDx são eficientes para este para marcação celular com uso de SP na concentração de 6 ?g/mL. Além disso, o ensaio de citotoxicidade evidenciou que a morte celular causada por essas NOF-Dx é miníma. Os testes in vitro mostraram que o acúmulo de NOF-Dx em CTM é exponencial até o período de 10 horas, sendo esse o tempo mínimo para incubação de NOF e CTM. O monitoramento por IRM foi eficaz na identificação das NOF-Dx tanto in vitro como in vivo. Além disso, quando a administração foi feita via local, o CTM marcadas com NOF-Dx conjugadas com SP, foram detectadas em até 5 dias por IRM sem perca de contraste. Conclusão: Diante do conjunto dos resultados, demonstra-se a eficiência da utilização de SP como importante facilitador da marcação de CTM com NOF-Dx. Os resultados in vitro e in vivo comprovam o alto potencial de rastreamento de terapia com CTM, através da IRM, utilizando NOF-Dx e sem causar prejuízo a viabilidade celular, sendo esta uma promissora estratégia para futuras aplicações de monitoramento de migração de CTM em terapia celular.