Papel dos receptores P2X2 e P2X7 na diferenciação neural in vitro

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Yuahasi, Katia Kioko [UNIFESP]
• Orientador(a): Ulrich, Alexander Henning [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002hfzr
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Proliferação de células; Receptores purinérgicos; Interferência de RNA
• Palavras-chave em Inglês: Cell Proliferation; Receptors, purinergic; RNA Interference
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/19026

Células-tronco embrionárias e células de carcinomas embrionários são modelos de diferenciação neural que permitem estudar os mecanismos de diferenciação, pois mimetizam os eventos críticos durante o início da embriogênese, adquirindo capacidade de maturação para se tornarem fisiologicamente funcionais. Esse estudo visa investigar o papel da expressão dos receptores P2X2 e P2X7 durante a diferenciação neural in vitro em linhagem de células P19 carcinoma embrionário pela down-regulação da sua expressão, usando o silenciamento gênico pela técnica do RNA de interferência (RNAi). Foram desenvolvidas células P19 expressando sequências shRNA interferentes para os receptores P2X2 e P2X7. Para examinar os efeitos dos silenciamentos gênicos dos receptores purinérgicos na diferenciação celular analisamos as expressões gênicas dos marcadores de células indiferenciadas (SSEA-1, antígeno embriônico estágio específico), progenitores neurais (nestina) e células neurais (β3-tubulina e GFAP). Além disso, os efeitos de RNAi sobre a proliferação celular e a atividade de vários receptores ionótropicos e metabótropicos foram avaliados. O silenciamento gênico dos receptores P2X2 durante a diferenciação neural das células P19 promoveu aumento da proliferação celular, diminuição significativa da expressão de proteínas β3-tubulina e elevação da expressão de GFAP, proteína especificamente expressa por glias, sugerindo que a proliferação promove o aumento de células gliais. Além disso, houve redução significativa da atividade do receptor colinérgico, possivelmente relacionada com o bloqueio da diferenciação de células P19 para neurônios colinérgicos. Portanto, o receptor P2X2 promove a neurogênese. Diferente do receptor P2X2, a inibição da expressão do receptor P2X7 durante a diferenciação neural de células P19 levou à redução da proliferação celular e da expressão de GFAP. Além disso, a expressão de β3- tubulina aumentou significantemente, sem alterações nos marcadores de células indiferenciadas (SSEA-1) e de progenitores neurais (nestina). Em células P19 diferenciadas expressando shRNA interferentes para o receptor P2X7, as respostas de [Ca2+]i induzidas pelo agonista BzATP foram reduzidas, relacionadas com a inibição da expressão do receptor P2X7. Portanto, esses resultados sugerem a participação do receptor P2X7 na gliogênese. Esse trabalho confirma a relevância de sinalização purinérgica na determinação do destino fenotípico da diferenciação neural, no qual os receptores P2X2 e P2X7 promovem a neurogênese e a gliogênese, respectivamente. Os shRNA interferindo com a expressão de receptores P2X2 e P2X7 serão úteis para estudos de mecanismo da diferenciação neural utilizando outros modelos de células-tronco.