Influência da deleção genética de receptores de cininas no metabolismo de óxido nítrico vascular

• Ano de defesa: 2011
• Autor(a) principal: Loiola, Rodrigo Azevedo [UNIFESP]
• Orientador(a): Pesquero, João Bosco [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Camundongos; Endotélio vascular; Receptor B1; Óxido nítrico; Cininas; Animais
• Palavras-chave em Inglês: Mice; Endothelium, vascular; B1 receptor; Kinins; Nitric oxide; Animals
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9747

A ativacao de receptores B1 de cininas no endotelio vascular desencadeia vias de sinalizacao que resultam na elevacao do Ca+2 intracelular e ativacao da enzima oxido nitrico sintase (NOS), seguido por producao de NO e vasodilatacao. Embora a inducao do receptor B1 e sua funcao durante a inflamacao tenha sido abordada por diversos estudos, a importancia de receptores B1 na homeostase vascular em condicoes fisiologicas nao esta totalmente elucidada. Para esclarecer essa questao, o presente estudo analisou a funcao endotelial e a producao de NO em camundongos nocaute do receptor B1 (B1 -/-) e selvagens (WT). O leito arteriolar mesenterico foi perfundido por solucao Krebs e respostas vasculares para Acetil-colina (ACh), nitroprussiato de sodio (SNP) e norepinefrina (NE) foram analisadas por um sistema de aquisicao de dados. Niveis plasmaticos de NO (ƒÊmol/L) foram analisados por deteccao dos derivados nitritos/nitratos atraves de metodo de quimioluminescencia e a producao vascular de NO foi avaliada em cortes histologicos de arteriolas mesentericas incubadas com DAF-2 DA, um marcador fluorescente de NO (unidades arbitrarias, u.a.). A atividade da NOS (pmol/mg.min) foi mensurada atraves da conversao bioquimica de L-[3H]arginina para L-[3H]citrulina em homogenatos de vasos mesentericos na presenca de substrato e co-fatores. Celulas endoteliais primarias foram incubadas com DAF-2 DA e as imagens obtidas em microscopio confocal foram analisadas por densitometria optica (u.a.). Celulas foram estimuladas com ACh [1 mmol/L] na presenca ou ausencia de Larginina, o substrato da NOS, ou tetrahidrobiopterina (BH4), co-fator da NOS, ou acido ascorbico, composto antioxidante. Producao de anion superoxido (u.a.) foi avaliada em celulas endoteliais incubadas com di-hidroetidina, um marcador fluorescente de anion superoxido, na presenca ou ausencia de BH4 ou acido ascorbico. Arteriolas mesentericas de B1 -/- exibiram severo comprometimento da vasodilatacao mediada por ACh, sem alteracoes na resposta ao NPS e NE. Os niveis circulantes de NO foram consideravelmente reduzidos em B1 -/- (49,6 } 10,5*; n=6) vs WT (141,9 } 17,3; n=6 ), acompanhado por reducao da producao basal de NO em arteriolas mesentericas de B1 -/- (0,16 } 0,03*; n=6) quando comparado a WT (0,58 } 0,08; n=4). A atividade da NOS foi elevada em amostras de B1 -/- (3,4 } 0,58*; n=4) em comparacao a WT (1,9 } 0,05; n=5). A producao de NO mediada por ACh foi significantemente reduzida em celulas endoteliais de B1 -/- (35,8 } 3,1*; n=4) quando comparado a celulas de WT (66,9 } 3,2; n=4). A producao de NO em celulas endoteliais de B1 -/- foi revertida por incubacao com BH4 (54,3 } 1,7; n=4) e acido ascorbico (101,8 } 6,0; n=4), mas nao por L-arginina, enquanto incubacao de celulas endoteliais de WT com BH4, acido ascorbico ou L-arginina nao teve efeito. A producao elevada de anion superoxido em celulas endoteliais de B1 -/- (77,1 } 2,5*; n=4) quando comparado a WT (29,3 } 6,9; n=4) foi revertida pela incubacao com acido ascorbico (35,3 } 6,4; n=3). O severo comprometimento da vasodilatacao mediada pelo endotelio acompanhado por reducao da biodisponibilidade de NO, apesar do aumento da atividade da NOS, sugere a exacerbacao da inativacao de NO em endotelio de B1 -/-. A producao elevada de anion superoxido em endotelio de B1 -/- provavelmente e responsavel pela exacerbacao da inativacao de NO nestes animais. Adicionalmente, a inativacao de BH4 por peroxinitrito pode acarretar em desacoplamento da NOS e producao de anion superoxido pela enzima.