Secreção de citocinas por células epiteliais pulmonares humanas durante a interação com Paracoccidioides brasiliensis. Modulação nos níveis de IL-6 e IL-8 por proteases do fungo

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Maza, Paloma Korehisa [UNIFESP]
• Orientador(a): Suzuki, Erika [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/0013000028611
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Paracoccidioides; Células epiteliais; Citocinas; MAP quinases reguladas por sinal extracelular; Proteínas quinases p38 ativadas por mitógeno; Serina proteases
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22025

Nesta tese, demonstramos que leveduras vivas ou fixadas com formaldeido de Paracoccidioides brasiliensis induzem aumento nas concentracoes de interleucina (IL)-6 e IL-8 nos sobrenadantes de cultura de celulas epiteliais pulmonares humanas A549. Entretanto, fator de necrose tumoral-α (TNF-α), IL-1β e interferon-γ (IFN-γ) nao foram detectados nestes sobrenadantes de cultura. Alem da secrecao de citocinas pro-inflamatorias, verificamos que P. brasiliensis promove a ativacao de ERK 1/2 (oextracellular signal-regulated kinase 1/2) e p38 MAPK (op38 mitogen-activated protein kinaseo) em celulas A549. Utilizando PD98059 (inibidor da ativacao da via ERK 1/2) e SB203580 (inibidor da ativacao de p38 MAPK), demonstramos que a secrecao de IL-6 e IL-8, induzida pelo fungo, e dependente da ativacao destas quinases. Quando comparamos as concentracoes de IL-6 e IL-8 nos sobrenadantes de cultura de celulas A549 incubadas com leveduras vivas ou fixadas de P. brasiliensis, verificamos que as concentracoes destas citocinas eram sempre mais elevadas nos sobrenadantes resultantes da interacao entre celulas A549 e leveduras fixadas com formaldeido. Entao, presumimos que estas diferencas nos niveis de citocinas poderiam ser devido a habilidade de leveduras vivas de expressar proteases que degradam IL-6 e IL-8. De fato, resultados obtidos por oWestern bloto, apos a incubacao de IL-6 (hrIL-6) e IL-8 (hrIL-8) recombinantes humanas com o fungo, indicam que leveduras vivas de P. brasiliensis expressam proteases que degradam estas citocinas. A inibicao da degradacao de hrIL-6 e hrIL-8 por AEBSF e aprotinina sugere que estas enzimas pertencem a familia de serino proteases. Desta maneira, demonstramos que a interacao entre P. brasiliensis e celulas A549 leva a ativacao de ERK 1/2 e p38 MAPK e, consequentemente, a secrecao de IL-6 e IL-8. Alem disso, os resultados apresentados nesta tese mostram, pela primeira vez, que leveduras deste fungo expressam proteases que degradam as citocinas pro-inflamatorias IL-6 e IL-8, o que poderia modular a inflamacao no hospedeiro