Expressão de epimerase de dermatam sulfato em linhagens de câncer de mama

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Xavier, Everton Galvao [UNIFESP]
• Orientador(a): Toma, Leny [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002sdbd
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Proteoglicanos; Epimerase De Dermatam Sulfato; Câncer De Mama; Dermatam Sulfato
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7679589; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59715

O câncer de mama é um dos cânceres mais incidentes na população mundial, principalmente na população feminina. Estimativas estatistícas mostram que mais de 1,7 milhão de novos casos são registrados anualmente e destes, 522 mil vão a óbito. Até o ano de 2050 é previsto que mais de 3,2 milhões de novos casos desta patologia deverão ser registrados. Proteoglicanos são macromoléculas que contém um core protéico, ao qual se ligam covalentemente, cadeias de glicosaminoglicanos (GAGs). O dermatam sulfato (DS) é um GAG produzido pela epimerização de ácido glucurônico do condroitim sulfato a ácido idurônico (IduA) pela enzima epimerase (epiDS). Vários trabalhos mostram que proteoglicanos que contêm DS exercem importante papel em processos tumorigênicos. Isto se deve principalmente à flexibilidade que a presença de IduA confere à cadeia polissacarídica, permitindo interações específicas com proteínas, como fatores de crescimento, entre outras moléculas. Estudos também mostram que EpiDS-1 está altamente expressa em muitos tumores, em especial no carcinoma escamoso de esôfago. O objetivo deste estudo foi analisar a expressão de epiDS em linhagens celulares que caracterizam diferentes tipos de câncer de mama MCF-7 (Luminal A), MDA-MB-231 (Triplo negativa) e SKBR-3 (HER2). A expressão gênica da enzima foi realizada por qPCR e o conteúdo protéico foi analisado por citometria de fluxo e imunofluorescência. A viabilidade celular foi investigada por ensaio de MTT e o perfil de GAGs analisados por marcação com sulfato radioativo e eletroforese. Nossos resultados mostraram que a linhagem SKBR-3 apresentou um padrão de maior viabilidade celular, comparado com MCF-7 e MDA-MB-231. Ainda, as células SKBR-3 apresentaram maior expressão gênica da enzima epiDS, investigado por qPCR e maior conteúdo de 35S-DS. Curiosamente, os ensaios de imunofluorescência, com anticorpo específico para a enzima epimerase (epiDS), demonstraram maior marcação na linhagem MCF-7 comparativamente com as outras células. Observamos ainda que apenas as células SKBR-3 apresentaram epiDS na forma de vesículas e no compartimento perinuclear, sugerindo uma localização no Complexo de Golgi, contrastando com a localização no citoplasma das células MCF-7 e MDA-MB231. Nestas células, a localização da enzima EpiDS provavelmente comprometeu a formação das cadeias de DS, porém o core proteico do decorim pôde ser detectado pelo anticorpo. Ensaios com marcador específico confirmou a localização de EpiDS no Complexo de Golgi nas células SKBR-3, evidenciando, assim, que essa localização tenha sido determinante para a síntese de dermatam sulfato nesta linhagem, e que possivelmente, este DS desempenha um papel importante na viabilidade celular observada.