Estudos de biodisponibilidade e biodistribuição do Amblyomin-X

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Boufleur, Pamela [UNIFESP]
• Orientador(a): Tavassi, Ana Marisa Chudzinski [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001r696
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Experimentação Animal; Biodisponibilidade; Efeitos De Drogas; Análise; Farmacocinética
• Palavras-chave em Inglês: Animal Experimentation; Bioavailability; Effects Of Drugs; Analysis; Pharmacokinetics
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4924024; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50519

Objetivo: Amblyomin-X é uma proteína recombinante de 12,3 KDa, que inibe o fator Xa de coagulação sanguínea e induz apoptose de células tumorais e regressão do melanoma de camundongos. Estudos de farmacocinética se fez necessário para a identificação e localização do Amblyomin-X em animais saudáveis (sem tumor), para conhecer a velocidade e a extensão em que a proteína é absorvida pela circulação sistêmica até sua excreção, e em que órgãos a proteína tem afinidade. Métodos: Foram utilizados camundongos BALB/c fêmeas saudáveis, nos quais foi injetado o Amblyomin-X em diferentes concentrações (1 mg/Kg e 100 mg/Kg), o plasma, os órgãos (timo, coração, pulmão, fígado e rim) e urina foram coletados em diferentes tempos para análise. A análise dos órgãos e plasma foi através de SDS-PAGE e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (ESI-IT-TOF e MALDITOF). No caso da urina, a mesma foi tratada para extração de proteínas e peptídeos e também analisada por LC-MS. Em paralelo foram realizados experimentos utilizando o plasma de camundongos nas concentrações de 5, 50 e 200 mg/Kg em dose única e analisados após 24 horas, e nas concentrações de 5"e 50 mg/Kg em doses repetidas de 14 e 28 dias. O Amblyomin-X foi conjugado a uma sonda fluorescente (Ambly750S), onde foi empregado para a avaliação da cinética de biodistribuição em animais saudáveis. O tratamento foi realizado em dose única (1 mg/Kg) sendo as amostras recolhidas em diferentes tempos e também em doses diárias (1 mg/Kg) por 14 dias, nos dois casos foi utilizado o plexo retro orbital como via intravenosa. Resultados: O Amblyomin-X na concentração de 100 mg/Kg foi encontrado no plasma imediatamente após a aplicação e permaneceu até 2 h, tendo sua Cmax de 38 I-Ig/mLno Tmax de 30 minutos. O Amblyomin-X não foi encontrado no plasma nas concentrações de 5, 50 e 200 mg/Kg (dose única) após 24h e 5 e 50 mg/Kg injetado diariamente por 14 e 28 dias. Nos órgãos analisados pelo ESI-ITTOF foi identificado no timo após 10 minutos até 6 horas, coração em 45 minutos até 12 horas, pulmão em 10 minutos até 6 horas, baço em 1 hora permanecendo até 24 horas, fígado 45 minutos até 24 horas e rim em 45 minutos permanecendo até 24 horas. Foram identificados peptídeos correspondentes ao Amblyomin-X na urina após 24 horas da aplicação. Ambly750S aparece no fígado em 1 hora após a aplicação e a partir de 4 horas começa a ser excretado pela via renal. Em 26 horas x há sinais fluorescentes nos órgãos do trato urinário, principalmente na bexiga. Conclusões: O Amblyomin-X tem uma rápida saída do plasma pelo fato de não estar ligado à albumina. O Amblyomin-X permanece nos animais saudáveis por até 26 horas após a sua aplicação, sendo encontrada no rim em até 26 horas, indicando que a proteína não está não sendo metabolizada somente pelo fígado, mas também pelo rim. Após sua passagem pelo rim o Amblyomin-X é encontrado na urina, indicando sua via de eliminação.