O papel do miR-138 e miR-142-3p no desenvolvimento do melanoma

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Cruz, Adriana Taveira da [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/0013000020r4v
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Metástase neoplásica; Melanoma; MicroRNAs; Proliferação e apoptose
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3069759; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47304

miRNAs regulam a homeostase celular por meio do controle de vias associadas com diferenciação, proliferação e apoptose. Assim, alteração na expressão dos miRNAs pode contribuir com a transformação maligna. Nesse contexto, objetivou-se determinar miRNAs diferencialmente expressos ao longo da progressão do melanoma e estabelecer as implicações destas alterações no desenvolvimento deste tipo de câncer. Verificou-se que a expressão do miR-138 encontra-se aumentada na linhagem de melanoma metastático 4C11+ em relação à linhagem de melanoma não metastático 4C11-. Estas linhagens compõem o modelo celular murino de desenvolvimento do melanoma. Neste modelo, linhagens celulares mimetizam distintas etapas da gênese de melanoma humano. O estudo do gene do miR-138 revelou que este miRNA pode ser transcrito a partir de duas regiões diferentes no genoma, sendo então nomeados de acordo com origem cromossomal: o miR-138/1 é transcrito a partir do cromossomo 9, enquanto que o miR-138/2, é transcrito a partir do cromossomo 8 (no genoma de camundongo). Desta forma, a sequência madura destes dois miRNAs são idênticas, sendo distintas apenas as regiões flanqueadoras, que formam os precursores. Resultados da superexpressão do miR-138 na linhagem 4C11- demostraram que somente o pré-miR-138/2, e não o pré-miR-138/1, promove alteração no comportamento destas células. Quando transfectada com sequência precursora do miR-138/2 a linhagem 4C11- apresenta aumento da capacidade de proliferação, migração, resistência ao anoikis e formação de colônias em relação a linhagem parental. Ensaios in vivo também demostraram que 4C11- miR-138/2 é capaz de formar tumores de crescimento rápido e promover metástases pulmonares. Nenhuma destas alterações foi observada em células que supereexpressam miR-138 transcrito a partir do cromossomo 9. A proteína Trp53 também foi validada (raramente mutado em melanomas) como alvo da regulação mediada pelo miR-138. No entanto a regulação desta proteína foi excluisivamente regulada pelo miR-138 proveniente do cromossomo 8. Portanto, a hipotetizou-se que a sequência do precursor de miRNA (pré-miR) poderia estar envolvida no direcionameneto do miRNA maduro ao mRNA alvo. Além disso, EZH2, validada como um alvo de miR-138, apresenta expressão reduzida apenas na linhagem 4C11- superexpressando o miR-138/1, fato que enfatiza ainda mais a importância da sequência precursora na regulação do mRNA alvo. A expressão de miR-138 em amostras de melanoma primário e metastático também foi avaliada. Observou-se aumento da expressão de miR-138 em amostras de melanoma humano primário e metastático em relação à amostras de nevo benigno. Desta forma, demonstrou-se que o miR-138 pode contribuir com a gênese de melanoma e que esta molécula é capaz de regular a expressão de Trp53. Além disso, sugere-se pela primeira vez que a sequência precursora pode participar no direcionamento miRNAs para alvos de mRNAs. Na segunda etapa de deste trabalho, focamos nossos esforços na busca de miRNAs que pudessem ser utilizados como molécula prognóstica. Nós selecionamos miR-142-3p como um miRNA promissor após correlacionar a redução de sua expressão em pacientes com melanoma primário com informações clínico-patológicas relacionadas a um prognóstico ruim. A superexpressão de miR-142-3p em três linhagens de melanoma distintas promoveu redução na migração, proliferação e resistência ao anoikis nesta células. Portanto, sugerimos que a expressão do miR-142-3p poderia estar relacionado com a aquisição de cararterísticas menos agressivas no tumores. Por essa razão, nós iniciamos uma busca dos possíveis alvos do miR-142-3p, que poderiam explicar, pelo menos em parte, os eventos observados. Dentre os genes avaliados, selecionaram-se RAC1, GNB2 e ITGB8. De fato, determinou-se que RAC1 e ITGB8 são alvos diretos do miR- 142-3p.