Análise e aplicabilidade do corante composto por antocianinas do fruto do açaí (Euterpe oleracea) em cromovitrectomia em humanos

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Caiado, Rafael Ramos [UNIFESP]
• Orientador(a): Maia, Mauricio [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002s1jp
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Retina; Cromovitrectomia; Antomicinas; Açaí (Euterpe Oleracea)
• Palavras-chave em Inglês: Acai Fruit (Euterpe Oleracea); Chromovitrectomy; Anthocyanin
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=8033976; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59652

Objetivo: Caracterizar e quantificar as antocianinas do corante extraído do fruto do açaí (Euterpe oleracea), avaliar sua segurança em um modelo animal e testar sua aplicabilidade em cromovitrectomia em humanos. Métodos: No estudo 1, amostras de três concentrações de 10%, 25% e 35% do fruto do açaí (Euterpe oleracea), equivalentes a 100 mg, 250 mg e 350 mg de amostras liofilizadas, foram diluídas em 1 ml do tampão fosfato para obter um pH de 7 e uma miliosmolaridade de 300 mOsm. Foi utilizado um sistema de cromatografia líquida de alta performance (CLAE), com base na espectrometria de massa de antocianinas obtidas previamente, para caracterizar e quantificar as antocianinas presentes no novo corante. No estudo 2, 18 coelhos receberam injeções intravítreas com as concentrações de 10%, 25% e 35% do corante do açaí. Olhos controle receberam solução salina balanceada (SSB). Foram realizados, antes das aplicações, após 24 horas e depois de 7 dias, análise da eletrorretinografia (ERG), retinografia, angiofluoresceinografia (AFG), tomografia de coerência óptica (OCT), microscopia óptica (LM) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). No estudo 3, após aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa (CEP) da Universidade Federal de São Paulo e do Conselho Nacional de Ética em Pesquisa (CONEP) para o protocolo do estudo clínico das fases I/II, 25 pacientes foram selecionados. Critérios de inclusão: pacientes diagnosticados com buraco de mácula idiopático, de ambos os sexos, maiores de 18 anos. Critérios de exclusão: glaucoma prévio, uveíte ativa, outras condições oculares exceto buraco de mácula que poderiam afetar ou limitar resultados pós-operatórios. Técnica cirúrgica: Todos os pacientes foram operados pela técnica de vitrectomia padrão, utilizando quatro esclerotomias e um sistema de 23- gauge com iluminação acessória. Pacientes fácicos foram submetidos à cirurgia de facoemulsificação com implante de lente intraocular, seguido por descolamento da hialoide posterior e peeling (remoção) da Membrana Limitante Interna (MLI) e guiado pelo corante do açaí a 25%. Imediatamente após os procedimentos, um questionário sobre a habilidade de o corante pigmentar a hialoide posterior e a MLI foi entregue aos dez cirurgiões que realizaram as 25 cirurgias. A toxicidade do corante foi analisada por exames anatômicos e funcionais antes da cirurgia e nos dias 1, 30 e 180. A análise anatômica dos olhos testados incluiu acuidade visual, tonometria, biomicroscopia, fundoscopia, retinografia, AFG, OCT e angiotomografia por coerência óptica. A análise funcional foi realizada com ERG. Foram usados o teste t-student e a análise de variância (ANOVA) com medidas repetidas, e os valores de p<0,05 foram significantes. Resultados: Estudo 1 mostrou a presença de cinco moléculas diferentes de antocianinas independentemente da concentração do corante do açaí, na seguinte proporção: cianidina-3-0-glucosídeo > homoorientina> orientina > taxifolina > isovitexina. No estudo 2, em coelhos, a retinografia, com 24 horas, mostrou uma elevada opacidade vítrea com o aumento da concentração do corante. AFG e OCT não revelaram toxicidade em nenhuma das concentrações. ERG apresentou amplitudes reduzidas para onda–b em todas as concentrações comparada com a análise baseline. As medianas das amplitudes da onda-b diminuíram sem significância e a latência aumentou para as concentrações de 10% e 25%. Esses achados foram significantes para a concentração de 35%. LM e MET não mostraram anormalidades para 10% e 25%. MET, na concentração de 35%, revelou edema de células ganglionares em 24 horas com melhora em 7 dias. Vacuolização, corpos multilamelares e danos de feixes nervosos ocorreram em 24 horas e em 7 dias na camada nuclear interna. A ruptura da crista mitocondrial surgiu no segmento interno dos fotorreceptores em 24 horas, mas regrediu após 7 dias. No estudo 3 (em humanos), independentemente dos períodos testados, não foram identificados anormalidades funcionais nem anatômicas. Os resultados anatômicos mostraram uma taxa de fechamento de mácula em 19 dos 25 olhos operados. Todos os cirurgiões relataram que o corante na concentração de 25% pigmentou a hialoide posterior e a MLI com uma cor roxa. Os resultados do estudo clínico nas fases I/II, após seis meses, mostraram que o corante foi útil e seguro na identificação da hialoide posterior e do peeling da MLI em cromovitrectomia em humanos. Conclusões: O corante extraído do fruto do açaí é principalmente composto por antocianina cianidina-3-0-glucosídeo. O corante do açaí nas concentrações de 10% e 25% foi usado com segurança em coelhos. Após seis meses, os resultados clínicos em humanos (fases I/II) revelaram que o novo corante, com base nas antocianinas do fruto do açaí na concentração de 25%, foi seguro e eficiente para ser usado na identificação da hialoide posterior e da MLI durante a cirurgia vitreorretiniana em humanos. Esse corante roxo pode ser uma alternativa para a cromovitrectomia e estudos adicionais são necessários.