Estudo da fibrose no músculo esquelético mediada por receptores de angiotensina e tratamento do músculo lesionado por PRP e terapia gênica

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Yamaguchi, Roberta Sessa Stilhano [UNIFESP]
• Orientador(a): Han, Sang Won [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/0013000020gh0
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Fibrose; Fibras musculares esqueléticas; Plasma rico em plaqueta; Angiotensina; MicroRNAs; Patologia
• Palavras-chave em Inglês: Gene therapy; Fibrosis; Angiotensin; Alginate; Muscle
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47124; https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2661939

A fibrose é um processo que faz parte da recuperação tecidual, mas quando este processo é exacerbado, que frequentemente ocorre nos casos de lesões musculares mais profundas, leva a regeneração imperfeita do tecido. Os tratamentos atuais têm uma baixa eficácia para prevenção ou tratamento das complicações causadas pela fibrose tais como atrofia, contratura e dor seguida de perda funcional e fibrose pós-traumática. A hipertensão é um fator que contribui na fibrose, e a angiotensina II (Ang II), que é a principal responsável pela vasoconstrição, parece desencadear a sinalização de fibrose. Há uma comunicação entre as vias de sinalização de TGFB1 e Ang II no músculo cardíaco. Em paralelo há uma discussão discordante do papel do GM-CSF na fibrose do músculo esquelético. Para melhor compreender o processo fibrótico que ocorre no músculo esquelético pós-lesão, inicialmente foi estabelecido um modelo de lesão muscular seguido de sutura, que produz uma lesão profunda desenvolvendo fibrose em grande parte do músculo. Para avaliar a possível participação do AT1 e GM-CSF na promoção da fibrose, vários vetores foram construídos, entre eles, Lv-mirAT1a que expressa um microRNA para silenciar a expressão da proteína AT1a e Lv-GM-CSF que expressa GM-CSF. Tendo em vista que a injeção de solução lentiviral no músculo esquelético pode não ser eficiente para transdução desses vetores e provocar vazamento para outros tecidos, um hidrogel de alginato foi formulado para carrear lentivetores. Os animais tratados com o Lv-mirAT1a ou Lv-GM-CSF carreado no hidrogel de alginato reduziram drasticamente a fibrose muscular. Assim, inferiu-se que o AT1a deverá participar do processo fibrótico do músculo esquelético e sua inibição é uma boa estratégia para redução de fibrose pós-lesao. Por outro lado, o efeito da expressão do GM-CSF no controle da fibrose variou em função da progressão inflamatória, ou seja, sua expressão bem no inicio da inflamação acentuou fibrose, mas sua expressão na fase tardia reduziu drasticamente a fibrose, confirmando os resultados nossos de trabalhos anteriores. Os mediadores de fibrose, como angiotensina e fatores de crescimento, estão presentes no plasma, e na medicina do esporte o plasma rico em plaquetas (PRP) é muito utilizado para tratar vários tipos de lesões, inclusive a lesão muscular. Na tentativa de correlacionar os estudos acima com os fatores presentes nos PRP, o conteúdo molecular e celular desse preparo foi investigado. Dois métodos para preparação de PRP foram estabelecidos na base de dados da literatura e foram denominados de LPRP e PPRP. A xx diferença principal entre as duas preparações é a presença de leucócitos (LPRP) ou não (PPRP), mas o conteúdo celular e molecular destes PRPs variou acentuadamente. As linhagens celulares NIH3T3 (fibroblasto) e C2C12 (mioblasto) cultivadas com 1 % PRPs e 10 % SFB promoveram proliferação celular em diferentes padrões. O perfil de expressão de genes de 6 fatores de crescimento analisados mostrou que cada PRP para cada tipo celular o nível de expressão destes genes é variável significativamente. Em conclusão, demonstrou-se que o AT1 participa na fibrose do músculo esquelético e sua inibição via microRNA é uma boa alternativa para redução de fibrose. A expressão forçada do GM-CSF no início da lesão muscular promove a formação de fibrose, mas sua expressão nos dias depois reduz drasticamente a fibrose. Para expressão tardia do GM-CSF através do lentivetor e de forma contida in loco, a formulação do hidrogel de alginato com lentivetor desenvolvida aqui foi ideal. Quanto aos PRPs, os leucócitos contidos no LPRP leva a formação de PRP com qualidade e quantidade diferente de células e moléculas, consequentemente, seus efeitos nas células alvo foram bem diferentes.