Papel de oct4, sox2 e caspase-3 na quiescência dos gonócitos de rato

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Arantes, Anelise Diniz [UNIFESP]
• Orientador(a): Teixeira, Taiza Stumpp Teixeira [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Diferenciação celular; caspase; Fatores de transcrição; Antígeno nuclear de célula em proliferação; Células germinativas; Ratos
• Palavras-chave em Inglês: Cell differentiation; Caspase-3; Transcription factors; Proliferating cell nuclear antigen; Germ cell; Mice
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=1841111; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46427

Introdução: As células germinativas originam-se do epiblasto e migram para as gônadas, onde se tornam gonócitos. Os gonócitos são os precursores das espermatogônias tronco, mas pouco se sabe sobre a sua diferenciação. O controle rígido de proliferação, quiescência e expressão de marcadores pluripotentes dos gonócitos é crucial para o desenvolvimento das células germinativas. Objetivo: Identificar a fase embrionária do período de quiescência dos gonócitos de rato e se a Caspase-3 (Casp3) atua nesse processo. Métodos: Gônadas embrionárias de ratos foram coletadas aos 15, 17 e 19 dias pós coito (dpc). A expressão de Casp3 clivada, de marcadores de pluripotência (SOX2, OCT4) e proliferação (Ki67, Retinoblastoma fosforilada 1 (pRB1)) foi analisada. Testículos de embrião de 19dpc foram incubados com inibidor de Casp3 e submetidos à marcação de Ki67, PCNA, Casp3 e NANOG para investigação do papel desta enzima na quiescência dos gonócitos de rato. Resultados: Gonócitos positivos para Ki67 e pRB1 foram observados aos 15dpc e, em menor número aos 17dpc. Aos 19dpc todos os gonócitos estavam negativos para estas proteínas, indicando que o período de quiescência tem início aos 15dpc e que aos 19dpc todos os gonócitos estão em quiescência. A marcação de OCT4 seguiu o mesmo padrão, enquanto o SOX2 foi detectado somente aos 15dpc. Estes resultados sugerem que o estabelecimento do período de quiescência dos gonócitos de rato envolve a inibição da expressão desses marcadores de pluripotência. A marcação da Casp3 seguiu exatamente o padrão inverso da expressão de Ki67, pRB1 e OCT4, indicando que a quiescência dos gonócitos de rato envolve o aumento da expressão desta proteína. A Casp3 manteve-se presente nas gônadas incubadas com inibidor de Casp3, o que já era esperado, pois o inibidor não implica na degradação da proteína. O Ki67 se manteve ausente nos gonócitos, indicando que a inibição de Casp3 não reativa o ciclo celular. O NANOG foi detectado no citoplasma dos gonócitos aos 19dpc e seu padrão de detecção foi idêntico ao da Casp3, sugerindo que este marcador de pluripotência atua no controle do ciclo celular das células germinativas durante a fase embrionária e talvez interaja com a Casp3. Gonócitos positivos e negativos para PCNA foram observados aos 19dpc. O padrão de detecção do PCNA nas gônadas submetidas à cultura foi o mesmo. Entretanto, as gônadas tratadas com inibidor de Casp3 apresentaram maior quantidade de gonócitos negativos, sugerindo que a Casp3 é um regulador positivo do PCNA. Conclusões: Estes resultados sugerem que a inibição de OCT4 e SOX2, bem como a expressão de Casp3 e NANOG estão envolvidos na quiescência dos gonócitos de rato e que o PCNA depende da atividade da Casp3 nessas células.