Viabilidade e morte celular em queimaduras In vitro
| Ano de defesa: | 2018 |
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Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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Resumo: | Queimaduras são responsáveis por alterações fisiopatológicas, celulares e moleculares e representam formas graves de trauma. Poucos são os estudos in vitro que possibilitem a análise da viabilidade e morte celular em queimaduras térmicas. Métodos: 1) Foram utilizadas células de linhagem de fibroblastos NIH-3T3, que foram submetidas a queimadura térmica por 30s a temperaturas especificadas; 2) Os efeitos da lesão térmica sobre a viabilidade celular foram determinados por ensaio MTT, citometria de fluxo e imunohistoquímica; 3) a análise estatística foi realizada pelo teste de variância ANOVA, para p<0.05, considerando a média e erro padrão de quadriplicatas, n=4. Resultados: o ensaio MTT determinou duas curvas gráficas (duas fases) com um ponto de inflexão para a temperatura delta de 15ºC. A análise por Citometria de Fluxo indicou que com o aumento do delta de temperatura houve progressivamente aumento de apoptose seguido pelo aumento progressivo de necrose. A Imunohistoquímica evidenciou que com o aumento da temperatura houve diminuição de número de células e do número de mitoses, mudanças na estrutura da membrana e citoesqueleto (formação de vesículas), com núcleos picnóticos e irregulares. Conclusão: Com o aumento da temperatura de lesão térmica houveram mudanças significativas na atividade celular e viabilidade (mudanças drásticas na morfologia, com lise celular e aumento progressivo de apoptose e necrose das células NIH 3T3). |
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Mestradohttp://lattes.cnpq.br/1619822351741819Fernandes, Ana Carolina Morais [UNIFESP]http://lattes.cnpq.br/2375853964441250Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Ferreira, Lydia Masako [UNIFESP]São Paulo2020-03-25T11:44:01Z2020-03-25T11:44:01Z2018-03-30Queimaduras são responsáveis por alterações fisiopatológicas, celulares e moleculares e representam formas graves de trauma. Poucos são os estudos in vitro que possibilitem a análise da viabilidade e morte celular em queimaduras térmicas. Métodos: 1) Foram utilizadas células de linhagem de fibroblastos NIH-3T3, que foram submetidas a queimadura térmica por 30s a temperaturas especificadas; 2) Os efeitos da lesão térmica sobre a viabilidade celular foram determinados por ensaio MTT, citometria de fluxo e imunohistoquímica; 3) a análise estatística foi realizada pelo teste de variância ANOVA, para p<0.05, considerando a média e erro padrão de quadriplicatas, n=4. Resultados: o ensaio MTT determinou duas curvas gráficas (duas fases) com um ponto de inflexão para a temperatura delta de 15ºC. A análise por Citometria de Fluxo indicou que com o aumento do delta de temperatura houve progressivamente aumento de apoptose seguido pelo aumento progressivo de necrose. A Imunohistoquímica evidenciou que com o aumento da temperatura houve diminuição de número de células e do número de mitoses, mudanças na estrutura da membrana e citoesqueleto (formação de vesículas), com núcleos picnóticos e irregulares. Conclusão: Com o aumento da temperatura de lesão térmica houveram mudanças significativas na atividade celular e viabilidade (mudanças drásticas na morfologia, com lise celular e aumento progressivo de apoptose e necrose das células NIH 3T3).Introduction: Burns are responsible for pathophysiological, cellular and molecular changes and represent a severe form of trauma. There are few in vitro studies that allow the analysis of viability and cell death in thermal burns. Objective: To develop an experimental in vitro burn model capable of evaluating the activity of skin cells such as NIH-3T3 fibroblast line cells under thermal stress conditions for specific temperature values. Characterizing the cellular morphology and the process of cell death by necrosis and / or apoptosis associated with thermal burn, impossible to be evaluated for skin cells in vivo. Methods: 1) NIH-3T3 fibroblast line cells were used, which were subjected to thermal burn for 30s at specified temperatures; 2) The effects of thermal injury on cell viability were determined by: MTT assay, flow cytometry and immunohistochemistry; 3) statistical analysis was performed by the ANOVA variance test, for p <0.05, considering the mean and standard error of quadriplicates, n=4. Results: the MTT assay determined two graphical curves (two phases) with an inflection point for the delta temperature of 15 ° C; flow cytometric analysis indicated that with the increase of the delta temperature there was progressively increase in apoptosis followed by progressive increase in necrosis; the immunohistochemistry evidenced that with the increase in temperature there was a decrease in number of cells and number of mitosis, changes in membrane structure and cytoskeleton (formation of vesicles), with pycnotic and irregular nuclei. Conclusion: With the increase of thermal injury temperature there were significant changes in cellular activity and viability; drastic changes in morphology, with cellular lysis and progressive increase of apoptosis and necrosis of NIH 3T3 cells.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2018)60 f.https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6371073Dissertação_Ana Carolina Morais Fernandes.pdfhttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/52530ark:/48912/001300001crjvporUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)info:eu-repo/semantics/openAccessQueimadurasLinhagem celularCélulas NIH 3t3FibroblastosMorte celularViabilidade e morte celular em queimaduras In vitroViability and cell death in in vitro burns.info:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPSão Paulo, Escola Paulista de MedicinaCirurgia TranslacionalCiências da SaúdeEstresse Oxidativo e Modelos Experimentais em TransplantesORIGINALAna Beatriz Quintes Steiner - A.pdfAna Beatriz Quintes Steiner - A.pdfTese de doutoradoapplication/pdf1791897https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/e8a7805f-6c6d-404f-9fdd-ce7240569107/downloadc11c6b63a91bea317384fa3904de4cdaMD52TEXTAna Beatriz Quintes Steiner - A.pdf.txtAna Beatriz Quintes Steiner - A.pdf.txtExtracted texttext/plain116958https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/7764f3ca-0c86-4a6d-98db-d0668f13eaf8/downloadacb058e66c7a0f3031ffdeb159c6656aMD53THUMBNAILAna Beatriz Quintes Steiner - A.pdf.jpgAna Beatriz Quintes Steiner - A.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3050https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/ec5d222c-5cb1-4fdf-b12d-75585bdd3906/download10b9d0f61679853e71302c1215363810MD5411600/525302024-08-10 12:44:26.646oai:repositorio.unifesp.br:11600/52530https://repositorio.unifesp.brRepositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.unifesp.br/oai/requestbiblioteca.csp@unifesp.bropendoar:34652024-08-10T12:44:26Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)false |
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