Análise de anticorpos anti-glicolipídeos em soros de pacientes com doença de chagas e paracoccidioidomicose. Estudos e propriedades do anticorpo monoclonal bst-1 dirigido a resíduos de β-d-galactofuranose de trypanosoma cruzi

• Ano de defesa: 2006
• Autor(a) principal: Bertini, Silvio [UNIFESP]
• Orientador(a): Straus, Anita Hilda [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001zw97
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Glicolipídeos; Anticorpos; Doença de Chagas; Paracoccidioidomicose; Trypanosoma cruzi
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/8916

Nesta tese analisamos anticorpos presentes em soros de pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) e doença de Chagas reativos com glicolipídeos contendo ou não resíduos de galactofuranose (Galf). Por ELISA, verificamos que 100% dos soros de pacientes com PCM foram reativos com o glicolipídeo Pb-1, isolado de Paracoccidioides brasiliensis, cuja estrutura é: Galfβ1- 6(Manpα1-3)Manpα1-2Ins-P-Cer, mas não reconheceram os glicolipídeos Pb-2 e glucosilceramida. Soros de pacientes com PCM antes e durante o tratamento com antifúngicos foram testados quanto a reatividade com o antígeno Pb-1. Foram verificados altos títulos de anticorpos anti-Pb-1 em pacientes antes do tratamento, e tratados por um período de 1 a 4 meses. IgG (IgG1), IgM e IgA foram as principais imunoglobulinas de imunoglobulinas dirigidas ao antígeno Pb-1. Soros de pacientes com doença de Chagas foram altamente reativos com glicolipídeos de epimastigotas de T. cruzi da cepa CL, apresentando menor afinidade por glicolipídeos purificados de epimastigotas da cepa Tulahuen. IgG1, IgM e IgA foram as principais imunoglobulinas presentes em soros de pacientes com doença de Chagas dirigidas aos glicolipídeos de epimastigotas. Com o propósito de se obter uma ferramenta importante para avaliar o papel dos glicolipídeos contendo resíduos de Galf na patogenia da doença de Chagas, foi produzido um anticorpo monoclonal (mAb), denominado de BST-1, dirigido a glicolipídeos de epimastigotas da cepa CL. Por ELISA, foi verificado que o mAb BST-1 é reativo com glicolipídeos majoritários expressos em epimastigotas das cepas CL e Y, reconhecendo um componente minoritário da cepa G e não reconhecendo glicolipídeos da cepa Tulahuen.Por “Western blotting” demonstrou-se que o mAb BST-1 reconhece somente glicolipídeos em epimastigotas das cepas CL e Y, enquanto que em epimastigotas das cepas G e Tulahuen, o mAb BST-1 reconhece componentes glicoproteicos. Já, tripomastigotas e amastigotas de cultura foram reconhecidos pelo o mAb BST-1, e forte imunofluorescência foi detectada em todo o parasita. Componentes de alto peso molecular (180-210 kDa) foram identificados como os principais antígenos reconhecidos pelo mAb BST-1 nestes parasitas. O mAb BST-1 inibe em cerca de 74% a adesão/infecção de tripomastigotas em células Vero. Nesta tese demonstrou-se que a Aureobasidina A (AbA), inibidor da enzima inositol fosfoceramida sintase, inibe significativamente o crescimento de epimastigotas e amastigotas intracelulares. O estudo de esfíngolipídeos de parasitas e fungos abre novas perpectivas para o desenvolvimento de quimioterápicos mais específicos e potentes para doença de Chagas e micoses sistêmicas.