Os efeitos do tratamento com esculina sobre a expressão do receptor P2X7 e disfunção mitocondrial na nefropatia diabética experimental

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Serralha, Robson Souza [UNIFESP]
• Orientador(a): Higa, Elisa Mieko Suemitsu [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002b2c0
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Diabetes mellitus experimental; Nefropatias diabéticas; Doenças mitocondriais; Receptores purinérgicos P2X7; Esculina; Ratos Wistar
• Palavras-chave em Inglês: Rats, Wistar
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11600/62458; https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=9104855

Objetivo: Avaliar os efeitos do tratamento com esculina sobre a disfunção mitocondrial e expressão do receptor P2X7 no córtex renal de ratos diabéticos. Métodos: Ratos Wistar machos com 7 semanas de vida e peso entre 170 g — 220 g foram todos uninefrectomizados. Para indução do diabetes, utilizamos estreptozotocina na concentração de 60 mg/kg administrada por via intravenosa. Os animais do grupo controle receberam apenas o veículo da droga, tampão citrato. O diabetes foi confirmado 48 horas após a indução com os animais em jejum de 3 horas, e consideramos positivos os valores de glicemia iguais ou superiores à 200 mg/dL. Animais do grupo controle e diabético foram escolhidos randomicamente para receberem doses diárias de hidrato de esculina na concentração de 50 mg/kg, via gavagem, ou o seu veículo. Os animais foram colocados em gaiolas metabólicas após confirmação do diabetes e na oitava semana de protocolo para coleta de urina de 24 horas e uma pequena alíquota de sangue, coletada via plexo retro-orbital com os animais anestesiados. Ambas as amostras foram usadas para análises bioquímicas de creatinina, ureia, proteinúria e espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico. Terminada a oitava semana de protocolo, os animais foram eutanasiados sob anestesia e o córtex do rim remanescente foi direcionado para análises histológicas; Western blotting, utilizando anticorpos anti-P2X7, anti-calpaína-1 e anti-fator indutor de apoptose (AIF); e também para análises de consumo de oxigênio mitocondrial, realizadas em oxígrafo de alta resolução utilizando substratos dos complexos I (piruvato-malato), II (succinato) e da beta-oxidação (palmitoil-carnitina). Os resultados foram descritos como média ± EP com significância para p < 0,05, onde utilizamos o software GraphPad Prisma 6.0. Resultados: Animais diabéticos apresentaram os sintomas clássicos da doença (poliúria, polifagia, polidipsia e perda de peso), bem como redução na função renal, presença de proteinúria e aumento dos níveis de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico. O tratamento com esculina não conseguiu reverter estas condições, mas reduziu os achados histopatológicos, como a presença de infiltrados inflamatórios e deposição de colágeno. Animais diabéticos também apresentaram elevação no conteúdo proteico de P2X7 e redução da função mitocondrial. O tratamento com esculina conseguiu reduzir os níveis de P2X7 (-5,46 ± 3,81 vs 15,85 ± 8,88) e reestabeleceu a função mitocondrial à níveis de normalidade ao utilizarmos substratos do completo I (3,08 ± 0,17 vs 2,39 ± 0,08) e da β-oxidação (4,75 ± 0,08 vs 3,68 ± 0,20). Conclusão: Neste estudo, nos animais diabéticos, a esculina não teve efeitos sobre os parâmetros metabólicos, sobre a bioquímica da função renal e não alterou o TBARS. Mesmo não controlando o estresse oxidativo, as proteínas envolvidas na apoptose como o P2X7 e a calpaína encontraram-se reduzidos, resultando em proteção renal vista na histologia, e mais ainda, na melhora da função mitocondrial neste órgão. Deste modo, acreditamos que o prosseguimento deste estudo possa contribuir para controlar a progressão da nefropatia diabética.