Efeito da hiperglicemia nos canais para prótons sensíveis à voltagem: implicações para o diabetes mellitus

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Silva, Luisa Ribeiro [UNIFESP]
• Orientador(a): Miranda Filho, Manoel de Arcisio Miranda Filho [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002qbgm
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Hiperglicemia; Prótons; Diabetes melitus
• Palavras-chave em Inglês: Hiperglicemia; Prótons; Diabetes mellitus
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3603469; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46966

o diabetes mellitus tipo 1 resulta de uma destruição autoimune das células beta pancreáticas que determina a condição clínica de hiperglicemia associada à hipoinsulinemia. Os estágios avançados da doença estão associados a complicações metabólicas que resultam em disfunção e perda da massa celular. Diversos estudos correlacionam o desenvolvimento dessas complicações com estresse oxidativo, e têm demonstrado papel relevante da NADPH oxidase. Os canais para prótons dependentes de voltagem (Hv1) desempenham um papel importante na regulação do pH intracelular e do potencial de membrana durante mudanças do pH extracelular em situações fisiológicas ou fisiopatológicas, além de estarem associados com a NADPH oxidase. No entanto, modulação da expressão e/ou atividade de canais Hv1 e a inter-relação destes canais com a atividade da NADPH oxidase nesta doença é ainda ausente na literatura. Portanto, estudamos essa relação em células de micróglia provenientes de fetos de camundongos cujas mães são diabéticas (grupo DM) ou não (grupo controle). Em relação a caracterização eletrofisiológica dos canais para prótons, não foram observadas diferenças significativas na amplitude das correntes máximas em estado estacionário entre os grupos. No entanto, ao cultivarmos as células em alta glicose houve uma redução da corrente de prótons, acompanhado de um deslocamento da curva condutância - voltagem. Esse mesmo efeito foi notado ao transfectarmos o canal hHv1 fusionado a GFP em células de linhagem COS7. Ao visualizarmos essas células no microscópio confocal, observamos uma localização mais difusa do canal hHv1 nas células expostas a 25 mM de glicose por 24 horas, em contraste com concentrações mais baixas de glicose onde vimos o canal claramente na membrana. Levando em consideração nossos resultados, concluímos que a exposição a alta glicose reduz a corrente máxima de prótons em micróglia e em sistema heterólogo de expressão, alterando tanto parâmetros biofísicos do canal para prótons dependente de voltagem quanto a sua disponibilidade na membrana plasmática