Novo peptídeo troiano antitumoral derivado da proteína WT1 (Wilms - tumor 1): atividade antimelanoma de WT1-pTj e seus mecanismos de ação

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Massaoka, Mariana Hiromi [UNIFESP]
• Orientador(a): Travassos, Luiz Rodolpho Raja Gabaglia [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001srzx
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Biomarcadores tumorais; Genes do tumor de Wilms; Senescência celular; Antineoplásicos
• Palavras-chave em Inglês: Tumor protein 1 (WT1); Antitumor peptides; Cellular senescence; Melanoma; Dendritic cells
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48075; https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2701521

Em busca de marcadores tumorais preferencialmente expressos em células de melanoma, a aplicação de um protocolo de imunização baseado na subtração da tolerância imunológica possibilitou a produção e caracterização de anticorpos de especificidade bastante restrita reconhecendo a proteína WT1. Considerando o papel de WT1 na sobrevivência e na metástase de células de melanoma, uma sequência com características ?troianas? contendo uma série de resíduos de aminoácidos básicos (R/K) intercalados foi localizada na proteína WT1. O peptídeo, designado WT1-pTj, foi caracterizado como um agente que apresenta atividade antimelanoma in vitro e in vivo. Neste estudo, verificamos que o peptídeo WT1-pTj entrou rapidamente em células de melanoma e provocou a senescência celular, conforme foi sugerido pela coloração positiva para a atividade de SA-?-galactosidase, pelo aumento da atividade transcricional de p53 e pela indução dos reguladores negativos da proliferação celular p21 e p27. Além disso, o peptídeo se ligou à proteína supressora de tumor p53 e competiu com WT1 pela ligação à p53. O tratamento com WT1-pTj levou à inibição sustentada do crescimento de células de melanoma, à supressão da clonogenicidade e à parada do ciclo celular na fase G2/M. De modo notável, o tratamento com WT1-pTj inibiu o desenvolvimento de metástases e o crescimento subcutâneo do melanoma murino em modelos singenêicos, e prolongou a sobrevida de camundongos ?nude? inoculados com células de melanoma humano. Nossa investigação in vivo inicial indicou o papel imunomodulador de WT1-pTj, mostrando que células dendríticas singenêicas ativadas pelo peptídeo ex vivo protegeram contra a progressão do melanoma, mesmo em animais com tumores já estabelecidos. Em paralelo, constatamos que o tratamento com o peptídeo induziu a maturação fenotípica e funcional de células dendríticas in vivo e maior produção de citocinas, tais como a IL- 6 e IL-12. Simultaneamente, uma diminuição marcante na produção de TGF-ß1 foi observada em células dendríticas recuperadas de camundongos tratados com WT1-pTj. Ainda, a atividade antitumoral mediada por WT1-pTj foi associada com uma frequência aumentada de linfócitos T infiltrantes tumorais (CD8+ e CD4+células T regulatórias (CD4+ Foxp3+atividade antimelanoma de WT1-pTj e indicam que este) e células NK1.1+) esplênicas. Coletivamente, nossos dados demonstram a atividade antimelanoma de WT1-pTj e indicam que este peptídeo singular derivado de WT1 pode atuar como um potente adjuvante na imunoterapia do câncer.