Uso de oligonucleotídeos antisense como estratégia de redução da replicação viral do HIV-1 em cultivo celular

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Bastos, Michelle Carolina Dos Santos [UNIFESP]
• Orientador(a): Janini, Luiz Mario Ramos [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002td47
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: HIV-1; Oligonucleotídeo; Nanopartícula; Carga Viral
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7643368; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59210

INTRODUÇÃO: As infecções pelo HIV-1 são um problema mundial ainda longe de solução. O tratamento antiretroviral apesar de eficaz e bem tolerado não é capaz de erradicar o vírus dos pacientes. Um possível tratamento alternativo para a infecção do HIV-1 é a utilização de uma sequência específica de oligos antisense para inibir a replicação viral. OBJETIVO: Foram desenhados e avaliados oligos antisense quanto a sua atividade antiviral e citotoxicidade. Os oligos antisense anti-HIV-1 GAG 1, GAG 2, GAG 3, GAG 4, LTR 1, LTR 2 foram testados quanto sua atividade antiviral em células primárias em culturas, em combinação com as nanopartículas NPAlbumina Albumin Human Sigma A9731-1G, Albumin Bioscience Catalog #1001 e Phyto-Hase Enzyme. METODOLOGIA: As células de PBMC foram adquiridas pelo método de separação por gradiente de densidade através do ficoll-paque plus, ressuspendidas em RPMI suplementado e ativadas com PHA e IL-2. Foi realizada viabilidade com Trypan Blue e as células foram congeladas para as padronizações, que foram divididas em 2 etapas. Na 1ª etapa padronizamos o tipo da nanopartícula, a concentração do oligo, uso de células frescas, tempo de cultura frente a uma infecção e manipulação da mesma. Na 2ª etapa foram testados 6 oligos com concentração de 0,2μM com a nanopartícula escolhida em cultura com duração de 22 dias, na presença de controles positivos e negativos. Os 2mL retirados de cada condição de cada uma das 5 coletas realizadas, foram centrifugados, o pellet foi congelado e o sobrenadante foi utilizado para quantificar a carga viral. RESULTADOS: A viabilidade das células na presença de nanopartículas é melhor em relação ao controle negativo (sem infecção e sem nanopartículas) e a viabilidade das células com a nanopartícula 1 é melhor em relação às outras nanopartículas. A viabilidade das células é melhor quando o oligo está combinado com a nano 1 em relação às outras nanopartículas e também quando comparamos ao oligo sozinho. Os oligos antisense GAG 2 e GAG 3 apresentaram maior efeito frente à infecção, isto é, induziram maior redução da carga viral nas amostras tratadas ao compararmos com os controles sem oligos. CONCLUSÃO: a viabilidade celular foi melhor preservada quando foi combinado a nanopartícula 1 com os oligos. Com baixa concentração e baixa toxicidade, os oligos GAG 2 e GAG 3 foram os que melhor inibiram a replicação viral durante o tempo de cultura.