Avaliação molecular e imunohistoquímica da uretra de ratas após trauma induzido e terapia intravenosa com células-tronco derivadas de músculo

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Bilhar, Andreisa Paiva Monteiro [UNIFESP]
• Orientador(a): Castro, Rodrigo de Aquino [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Incontinência urinária; Células ronco; Uretra
• Palavras-chave em Inglês: Stem cells; Urinary incontinence; Urethra
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5760899; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/49880

Objetivo: Identificar a migração para uretra decélulas-tronco derivadas de músculo (MDSCs) após injeção intravenosa (IV) em ratas submetidas ao trauma do assoalho pélvico por distensão vaginal (DV). Analisar o efeito da injeção IV de MDSC, sete e trinta dias após DV através da expressão dos genes miosina de cadeia pesada do músculo liso (MYH11), miosina de cadeia pesada do músculo esquelético (MYH2), Desmina, marcador de proliferação celular mKi67, colágeno tipo I (COL1A1), colágeno tipo III (COL3A1), fator de crescimento neural (NGF) e fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFa) e da expressão imunohistoquímica das proteínas MYH11, MYH2 e Desmina.Métodos: MDSCs que expressavam proteína fluorescente verde (GFP) foram injetadas na veia da cauda das ratas três dias após DV. Foram analisadas uretras de cinco grupos: Controle, Trauma 7 dias (animais submetidos a DV, sacrificados com 7 dias), MDSC 7 dias (animais submetidos a DV que receberam terapia IV com MDSC, sacrificados com 7 dias), Trauma 30 dias (animais submetidos a DV, sacrificados com 30 dias), MDSC 30 dias (animais submetidos a DV que receberam terapia IV com MDSC, sacrificados com 30 dias). Foi realizada imunofluorescência para localização das MDSCs com 2 horas e 7 dias após injeção IV.RT-qPCR foi utilizado para expressão gênica e imunohistoquímica para identificação e quantificação proteica.Resultados:Foi identificada presença precoce das MDSCs na uretra, não sendo observadas após 7 dias. Após sete dias do trauma, o gene MYH11 foi sobre-expresso no grupo Trauma em relação ao Controle (p=0,01). Expressão do gene mKi67 estava aumentada no grupo MDSC em relação ao Trauma (p=0,03) e Controle (p=0,02).Expressão dos genes COL1A1 e COL3A1 aumentou no grupo MDSC em relação ao Controle (p=0,001 e p=0,002). Já a expressão gênica do NGF foi diminuída no grupo MDSC em relação ao Trauma (p=0,001) e não houve diferença na expressão do gene MYH2, Desmina e VEGF. Nesse mesmo período, expressão imunohistoquímica de MYH11, MYH2 e Desmina estava aumentada no grupo MDSC em relação ao Trauma (p=0,01; p=0,005 e p=0,02) e diminuída no grupo Trauma em relação ao Controle (p=0,01; p=0,008 e p=0,03).Após 30 dias do trauma, expressão dos genes MYH11 e MYH2 foi aumentada no grupo Trauma em relação ao Controle (p=0,03 e p=0,04). Expressão do gene mKi67 foi aumentada no grupo MDSC em relação ao Trauma (p=0,02) e Controle (p=0,01). Expressão do gene COL1A1 aumentou no grupo MDSC em relação aos grupos Controle (p=0,008) e Trauma (p=0,03) e expressão do gene COL3A1 aumentou no grupo MDSC em comparação ao Controle (p=0,03). Já a expressão gênica do NGF foi diminuída no grupo MDSC em relação ao Trauma (p=0,002) e não houve diferença na expressão gênica da Desmina e VEGF. Nesse mesmo período, expressão imunohistoquímica de MYH11, MYH2 e Desmina estava aumentada no grupo MDSC em relação ao Trauma (p=0,01; p=0,002 e p=0,01) e expressão do gene MYH2 diminuída no grupo Trauma em relação ao Controle (p=0,04).Conclusão:MDSCs migraram precocemente para uretra traumatizada, mas não se integraram ao tecido. Administração IV de MDSC altera a expressão de genes relacionados à proliferação celular, fator de crescimento neural e matriz extracelular e a expressão de proteínas da musculatura lisa e estriada em uretra traumatizada de ratas.