O papel da sumoilação de proteínas na biologia celular de giardia lamblia

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Genova, Bruno Martorelli Di [UNIFESP]
• Orientador(a): Tonelli, Renata Rosito [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/0013000028pth
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Sumoilação; Giardia lamblia; Ciclo celular
• Palavras-chave em Inglês: Sumoylation; Giardia lamblia
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3632550; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47888

Modificações pós-traducionais de proteínas (PTMs) aumentam a diversidade funcional do proteoma pela ligação covalente de grupos funcionais ou proteínas. PTMs incluem a adição de grupos químicos (acetil, metil, nitrosil), modificações nos aminoácidos (deaminação, eliminação), a ligação de moléculas mais complexas como açúcares (glicosilação), lipídeos (isoprenilação) ou outras proteínas. No último caso, ubiquitinação (adição de ubiquitina) e SUMOilação (adição de SUMO) são PTMs que ocorrem exclusivamente em eucariotos e que desempenham um papel central em uma série de processos biológicos. Por exemplo, a modificação de proteínas por SUMO (Small Ubiquitin-like MOdifier) está relacionada com o transporte núcleo- citoplasma, regulação de transcrição gênica, progressão no ciclo celular, estabilidade e localização celular de proteínas. Nesta tese, investigou-se o papel biológico da SUMOilação de proteínas em Giardia lamblia e os dados obtidos mostram que o genoma do parasito possui um único gene que codifica para uma proteína SUMO (GlSUMO) com 42,7 % de identidade em aminoácidos com a SUMO-1 humana. Nos trofozoítos GlSUMO pode ser encontrada majoritariamente no citoplasma, nos núcleos, na região perinuclear e na periferia das células onde co-localiza-se com as VSPs, sugerindo uma possível função da SUMO na variação antigênica de Giardia lamblia. Trofozoítos silenciados para a expressão de GlSUMO (pela técnica de RNA de interferência) apresentam-se como células morfologicamente aberrantes, com menor capacidade de adesão e crescimento lento quando comparados aos parasitos selvagens. Análise por citometria de fluxo e ensaios com análogo de timina (EdU) sugerem que as células com expressão de GlSUMO silenciada acumulam nas fases G1/S do ciclo celular. Além disso, os níveis de mRNA de ciclina B e de ?-giardina são diminuídos nos trofozoítos depletados de GlSUMO. O silenciamente de GlSUMO também interferiu no encistamento, de modo que os trofozoítos RNAi GlSUMO encistam menos; além disso os cistos produzidos apresentam a parede cística deformada em comparação com os cistos WT. CMGC quinase, malato desidrogenase, glicil t-RNA sintetase, quinase de uridina, actina, poli-A polimerase, Lek 1, chaperona dnaJ, fator de enlongação 2 e arginina deiminase foram identificados como possíveis substratos da GlSUMO após imunoprecipitação com um anticorpo anti-GlSUMO e por análise de espectrometria de massas. O conjunto de resultados sugerem que a SUMOilação está envolvida na regulação de genes do ciclo celular e da arquitetura celular em Giardia lamblia.