Descoberta de novos compostos contra o vírus Chikungunya por meio de uma abordagem fenotípica

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Ferreira, Douglas Sales Medina [UNIFESP]
• Orientador(a): Freitas Junior, Lucio Holanda Gondim de [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001fpb2
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Chikungunya (CHIKV); EC50; CC50; Vírus chikungunya; Antivirais; Febre de chikungunya; Antibacterianos
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11600/64165; https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=9467314

O vírus da febre chikungunya (CHIKV) é um arbovírus que foi isolado pela primeira vez nos anos 50 na Tanzânia, e até os dias atuais vem causando diversos surtos e epidemias ao redor do mundo. A doença é caracterizada por uma fase aguda típica de arboviroses, na qual o paciente pode apresentar sintomas como mialgia, letargia, febre alta, rash cutâneo e dores nas articulações. Esta doença também pode ser caracterizada por uma fase crônica, caracterizada por fortes dores nas articulações que podem durar de semanas a anos. Até o presente momento, não existe nenhum medicamento ou vacina aprovados para tratamento ou prevenção da febre chikungunya, e devido a sua ampla abrangência, ao alto número de casos todos os anos e sua fase crônica, que possui grande impacto na vida do paciente a longo prazo, existe a necessidade de um tratamento ou profilaxia. O reposicionamento de fármacos é uma abordagem amplamente utilizada para encontrar drogas com atividades diferentes das originalmente descritas. Isto acelera a busca por medicamentos, além de reduzir drasticamente o seu custo de desenvolvimento. No presente trabalho, foi utilizado um ensaio de alto conteúdo baseado em imagem para a triagem de uma biblioteca de 400 compostos contra o CHIKV. Após a padronização das condições experimentais, a triagem foi realizada e os dados foram imageados e analisados no equipamento. Utilizando ensaio de imunofluorescência, foram quantificados os núcleos das células e a fluorescência do vírus no citoplasma das células, classificando-as como células infectadas ou não, de acordo com a presença/ausência do vírus. Com esses parâmetros obtidos para cada uma das amostras e para os controles, foi calculada a atividade antiviral normalizada e a sobrevivência celular para cada composto. Os compostos da biblioteca foram testados em concentração única de 10 µM em dois ensaios independentes. Os compostos que apresentaram atividade normalizada e sobrevivência celular acima de 60% foram então testados em dose-resposta, e assim foram calculados o EC50, CC50 e índice de seletividade de cada um deles, e esses parâmetros foram utilizados para selecionar os melhores e mais promissores compostos. Ao final do ensaio realizado em dose-resposta, foram selecionados os três compostos que apresentaram melhor atividade, sendo dois antibióticos e um antiviral. Nenhum deles havia sido descrito contra CHIKV anteriormente.