Expressão de citocinas no estroma cervical de pacientes com neoplasia intra-epitelial cervical de alto grau após tratamento com Interferon α-2b intralesional

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: BORGES, Marisa de Carvalho
• Orientador(a): MURTA, Eddie Fernando Candido
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Triângulo Mineiro
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde
• Departamento: Instituto de Ciências da Saúde - ICS::Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: [Interferon-alfa.]; [Citocinas.]; [Neoplasias do colo do útero.]; [Interferon-alpha.]; [Cytokines.]; [Uterine cervical neoplasms.]
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA
• Link de acesso: http://bdtd.uftm.edu.br/handle/123456789/2064

Introdução: O câncer do colo do útero é o segundo tipo de câncer mais comum entre as mulheres, responsável pelo óbito de, aproximadamente 250 mil mulheres por ano sendo sua incidência duas vezes maior em países menos desenvolvidos. Atualmente está bem definido o papel do HPV como fator causal para o surgimento do câncer cervical e suas lesões precursoras, sendo os métodos excisionais bastante utilizados no tratamento dessas lesões. A infecção pelo HPV está se tornando cada vez mais frequente em pacientes jovens. Esse fato expressa a necessidade de terapias conservadoras como o interferon, que não altera a anatomia do colo e preserva o futuro reprodutivo das pacientes. Objetivos: Avaliar a expressão do RNA mensageiro das citocinas (IFN- , TNF- , IL-2, IL-12, IL-4, IL-10, TGF- 1, TGF- 2 e TGF- 3) no estroma do colo uterino de pacientes com NIC de alto grau, antes e após o tratamento com IFN -2b intralesional e avaliar a presença de HPV de alto risco nas pacientes com resposta satisfatória e com falha terapêutica, antes e após o tratamento. Casuística e Métodos: O grupo de estudo foi composto por 10 pacientes com idade entre 18 e 50 anos com diagnóstico de neoplasia intra-epitelial cervical de alto grau não submetidas a tratamento prévio. Neste trabalho foi utilizado o interferon -2b humano recombinante 3.000.000 U (Blauferon B R-Blausiegel) intralesional. As aplicações foram realizadas utilizando seringa de 1,0 ml e agulha 13 x 0,45 três vezes por semana em dias alternados (segundas, quartas e sextas-feiras), por 6 semanas consecutivas, perfazendo um total de 18 aplicações. A coleta da biópsia foi realizada antes da 1° aplicação e após a 18° aplicação do IFN -2b. Para análise da expressão do RNAm das citocinas foi realizada a técnica de PCR, utilizando-se iniciadores específicos para cada sequência 1 das citocinas estudadas. Após as reações de PCR, os produtos amplificados foram submetidos a eletroforese em gel de poliacrilamida a 10% e corados com prata. A avaliação da carga viral do HPV foi feita por Captura Híbrida. Resultados: No diagnóstico inicial, 60% (n=6) das pacientes eram NIC II e 40% (n=4) das pacientes eram NIC III. Quanto à resposta ao tratamento: 60% (n= 6) tiveram resposta enquanto que 40% (n= 4) tiveram falha terapêutica. Quanto aos hábitos e condições de vida questionados no protocolo inicial (paridade, tabagismo e número de parceiros sexuais) constatou-se que 70% (n=7) eram multíparas, 60% (n=6) eram tabagistas, 50 % (n=5) tinham tido 3 ou mais parceiros sexuais e a idade média da sexarca foi de 16,6 anos (mínima de 14 e máxima de 18 anos). Quanto a expressão de citocinas antes e após o tratamento com IFN -2b, observamos: ausência da expressão das citocinas Th1 (IFN- , TNF- , IL-2 e IL-12), antes do tratamento com IFN -2b nas pacientes que responderam e também nas que falharam ao tratamento. No entanto, após o tratamento com IFN -2b, observamos que pacientes com resposta satisfatória expressaram IFN- , IL- 2, TNF- sugerindo um potencial Th1 relacionado à cura. A expressão da IL-10 (Th2) estava ausente em todas as pacientes, antes e após o tratamento com IFN -2b. A IL-4 (Th2) estava expressa antes do tratamento com IFN -2b, em 2 pacientes que responderam e também em 2 pacientes que falharam ao tratamento. A expressão da IL-4, antes do tratamento com IFN -2b, em pacientes com falha terapêutica, sugere que o padrão de resposta imune Th2 pode ter contribuído para a persistência da lesão de alto grau. Ainda, a expressão concomitante da IL-4 e TGF- 3 em paciente com falha terapêutica após o tratamento com IFN -2b, sugere que a resposta imune Th3 pode ter modulado a resposta imune Th2, impedindo uma resposta satisfatória ao tratamento. Quanto à expressão do RNA mensageiro das citocinas TGF- 1, TGF- 2 e TGF- 3, não foi possível correlacionar os resultados com a resposta clínica ao tratamento com IFN -2b, uma 1 vez que 1 paciente com resposta satisfatória apresentou expressão concomitante do TGF- 1 e TGF- 2 após o tratamento com IFN -2b, enquanto outras duas pacientes que não responderam ao tratamento expressaram TGF- 2 e TGF- 3, após o tratamento com IFN -2b. Observamos também, que essas pacientes com falha terapêutica tiveram expressão concomitante de IL- 12/TGF- 2 e IL-4/TGF- 3, sugerindo que a resposta imune Th3 pode ter modulado a resposta imune Th1 e Th2 durante o tratamento com IFN e por isso houve falha terapêutica. Resultados controversos são encontrados em trabalhos que analisam a presença de citocinas Th1, Th2 e Th3 em lesões pré-malignas do colo uterino. Queda significativa da carga viral do HPV de alto risco foi observado nas pacientes com resposta terapêutica satisfatória (p=0,0313, teste de Wilcoxon), após o tratamento com IFN -2b. Conclusões: O tratamento com IFN -2b intralesional nas pacientes com NIC de alto grau, obteve resposta clínica satisfatória em 60% das pacientes. A resposta imune Th1 (IFN- , TNF- , IL-2) parece estar relacionada com a diminuição do grau da NIC, após o tratamento com IFN - 2b nas pacientes com boa resposta. A expressão de TGF- , após o tratamento com IFN -2b nas pacientes com falha terapêutica, sugere um papel imunomodulador desta citocina inibindo a resposta protetora Th1. Houve diminuição significativa na carga viral do HPV de alto risco nas pacientes que responderam ao tratamento com IFN -2b.