Classificação das alterações cromatínicas de espermatozoides bovinos e sua correlação com a eficiência na produção in vitro de embriões

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Hiraiwa, Sara Hissae
• Orientador(a): Beletti, Marcelo Emílio
• Banca de defesa: Jacomini, José Octavio , Vasconcelos, André Belico de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Citologia; Cromatina; Espermatozoides; Fertilização in vitro; Cromatina espermática; Produção in vitro de embriões; Sperm chromatin; Computational analysis; In vitro production of embryos
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA BIOMEDICA
• Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/19046; https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.499

As alterações de cromatina, apesar de não serem avaliadas no espermograma de rotina, sabidamente influenciam a fertilidade de touros. O método de avaliação cromatínica mais utilizado é o SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay), entretanto este é de alto custo. Como alternativa a esta metodologia, a coloração com azul de toluidina (AT) após hidrólise ácida associada a análises computacionais se apresenta como uma ferramenta equivalente e acessível. Além de apresentar menor custo, esta metodologia mensura a intensidade de descompactação e heterogeneidade da cromatina. No entanto, ainda não se definiu que níveis de descompactação e heterogeneidade interferem na fertilidade do touro. Este trabalho tem como objetivos definir os níveis de descompactação e heterogeneidade cromatínicas aceitáveis para que não prejudique a fertilidade do touro e o desenvolvimento embrionário, propor uma classificação das alterações cromatínicas de espermatozoides bovinos de acordo com sua localização e verificar se cada tipo de alteração influencia no processo de fecundação e de desenvolvimento embrionário inicial. Para tal, foram utilizadas amostras de sêmen de animais induzidos à subfertilidade, as quais foram utilizadas para produção in vitro de embriões (PIVE). Estas amostras foram avaliadas pelo método de coloração com AT e posterior análise computacional. Para caracterização da fertilidade das amostras de sêmen, foram avaliadas as taxas de clivagem no segundo dia e de blastocistos morfologicamente normais no sétimo dia de cada rotina de PIVE. Utilizando análise de imagem computacional, foi possível fazer a seguinte classificação das alterações cromatínicas: descompactação na base da cabeça (DB), na metade basal (DMB), em áreas dispersas (AD), no eixo central da cabeça (DEC) e em toda a extensão da cabeça (DT). Foi utilizado teste de correlação de Pearson (p<0,05 e foi considerado uma tendência para 0,1>p>0,05) para correlacionar essas alterações com a eficiência da PIVE. Em relação à clivagem, DEC e DT apresentaram correlações negativas e significativas (p=0,03 e p=0,047, respectivamente), DB e DMB apresentaram uma tendência para uma correlação negativa (p=0,06 e p=0,07, respectivamente). Em relação à formação de blastocisto, DB apresentou uma tendência para correlação negativa (p=0,09). Além disso, foi testado dois níveis de anormalidade em relação à heterogeneidade (Het) e descompactação (Des) da cromatina: acima de 5% e acima de 10%. A Des apresentou correlação significativa em relação à clivagem quando utilizado níveis acima de 5 e 10% de descompactação (p=0,03 e p=0,02, respectivamente). Já para Het, não houve correlações significativas tampouco tendências com a eficiência da PIVE. Assim, ficou demonstrado que em PIVE, a descompactação no eixo central e total da cabeça do espermatozoide interfere intensamente no processo de fecundação. Os demais tipos de alterações também podem interferir na fecundação de forma menos intensa. A DB pode interferir na formação de blastocistos. Para a avaliação da descompactação, espermatozoides acima de 5% de Des interferem no processo de fecundação. Já a heterogeneidade, independentemente do nível considerado, não interfere em ambos os parâmetros avaliados.