Extração de DNA de plantas do Cerrado: metodologia inédita e eficiente

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Souza, Diego Cerveira de
• Orientador(a): Teixeira, Terezinha Aparecida
• Banca de defesa: Resende, Daiane Silva, Duarte, Gilvan Caetano
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Biotecnologia
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Diversidade genética; Metabólitos secundários; SDS; Triton X-100; Biotecnologia; DNA; Plantas do Cerrado; Genetic diversity; Secondary compounds
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
• Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/24776; http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2019.323

O Cerrado é a savana mais rica do planeta em biodiversidade, sendo considerado um dos 35 hotspots mundiais, ou seja, áreas prioritárias para conservação pela alta taxa de degradação e número de espécies endêmicas. Diversas espécies do bioma também possuem potencial para aproveitamento econômico, para fins alimentícios, madeireiros, ornamentais e medicinais. Porém, as plantas do Cerrado são geralmente ricas em metabólitos secundários, especialmente compostos fenólicos, os quais dificultam a extração de DNA em quantidade e qualidade suficiente para análises moleculares, essenciais para programas de conservação ou melhoramento. Os métodos de extração descritos até hoje muitas vezes não se adequam às características destas espécies e/ou são demorados, caros e utilizam reagentes tóxicos. Neste contexto, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento de um novo e eficiente método para extração de DNA de plantas do Cerrado, de maneira mais rápida, barata e segura, bem como a comparação do tempo e custos envolvidos no protocolo aqui descrito e naqueles já testados para espécies vegetais do bioma. Nosso método, baseado no uso conjunto de SDS e Triton X-100, dispensa a necessidade de múltiplas etapas de purificação e reduz o uso de reagentes caros e/ou tóxicos. Para os testes, foram selecionadas 10 espécies representativas do bioma Cerrado. A qualidade e quantidade do DNA extraído foram analisadas por espectrofotômetro e em gel de agarose e a sua adequabilidade para estudos moleculares avaliada através de digestão com enzima de restrição e amplificação via PCR com marcador RAPD. O DNA obtido pelo nosso método apresentou-se íntegro, livre de contaminantes e excelente para digestão e amplificação via PCR. A concentração média do DNA entre as espécies testadas variou de 156 a 1166 ng.µL-1 e a relação A260/A280 de 1,78 a 1,92. O nosso protocolo também se mostrou mais rápido e barato, quando comparado com os métodos de extração de DNA já testados para espécies do bioma. Portanto, o protocolo apresentado aqui será uma importante ferramenta para análises moleculares de espécies do Cerrado.