Identificação de AGEs na saliva como método de diagnóstico do diabetes mellitus

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Muraoka, Mariane Yumiko
• Orientador(a): Espindola, Foued Salmen
• Banca de defesa: Moresco, Rafael Noal , Loureiro, Ana Paula de Melo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: produtos finais de glicação avançada; advanced glycation end products; biomarcador; biomarker; saliva; diabetes; FTIR; estresse oxidativo; oxidative stress
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
• Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/31311; http://doi.org/10.14393/ufu.di.2020.859

O Diabetes mellitus (DM) é um distúrbio metabólico crônico caracterizado por altos níveis de glicose no sangue que resultam da deficiência absoluta ou relativa de insulina. Um dos principais mecanismos que leva às complicações envolvidas no DM, é a formação de produtos finais de glicação avançada (AGEs). O processo de glicação refere-se a uma sequência de reações não enzimáticas que se inicia quando açúcares redutores reagem com proteínas, lipídeos ou ácidos nucléicos, gerando os AGEs, que podem alterar a integridade dos tecidos. O objetivo do trabalho foi quantificar os AGEs na saliva pelo ensaio de glicação in vitro, possibilitando, assim, o desenvolvimento de um novo método de diagnóstico do DM. Albumina do soro bovino (BSA), lisozima, saliva e α-amilase salivar foram glicados com frutose e metilglioxal (MGO). Foram realizadas análises de fluorescência (350nmex e 420nmem), atividade da α-amilase salivar, danos oxidativos, SDS-PAGE, Western blotting para detecção da α-amilase salivar, e caracterização por espectroscopia de ATR-FTIR. A análise de fluorescência registrou aumentos na intensidade em todas as amostras glicadas, exceto na saliva com frutose. A atividade enzimática da α-amilase salivar foi reduzida após glicação com frutose e MGO. Os danos oxidativos gerados por frutose e MGO foram determinados pelo aumento significativo no conteúdo de proteínas carboniladas em todas as amostras glicadas, exceto na saliva glicada com frutose. Já o conteúdo de sulfidrilas apresentou redução significativa nas amostras de lisozima com frutose e MGO e de saliva com MGO. No perfil eletroforético foi possível observar o surgimento de uma nova banda próximo a 95kDa em BSA com MGO. A lisozima glicada revelou bandas com pesos moleculares de 28, 36 e 55kDa após glicação. Na saliva foi observado diminuição na intensidade das bandas de pesos moleculares próximos a 80, 78, 56, 30 e 14kDa nas amostras glicadas, sendo essa diminuição mais acentuada na saliva com MGO. Western blotting realizado com as amostras de saliva mostrou redução na concentração de α-amilase salivar, dada em % de densidade de pixels, após glicação com MGO. A utilização do ATR-FTIR permitiu avaliar e distinguir picos nos espectros em BSA e lisozima glicadas com frutose e MGO, e na saliva glicada com frutose. A partir dos resultados é possível concluir que a saliva constitui um fluido possível de ser utilizado como indicador da presença de AGEs. Dessa forma, a identificação de AGEs na saliva representa uma alternativa vantajosa para avaliar a evolução do diabetes e a ocorrência de complicações crônicas desta doença.