Expressão heteróloga de abaecina de Apis mellifera em Pichia pastoris

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2011
Autor(a) principal: Luiz, Denis Prudêncio lattes
Orientador(a): Ueira-Vieira, Carlos lattes
Banca de defesa: Bonetti, Ana Maria lattes, Machado, Luiz Fernando Almeida
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica
Departamento: Ciências Biológicas
País: BR
Palavras-chave em Português:
Abaecina
Pichia pastoris
Apis mellifera
Expressão heteróloga
Abelha - Genética
Palavras-chave em Inglês:
Abaecin
Heterologous expression
Área do conhecimento CNPq:
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15854
Resumo: CHAPTER 2: Antimicrobial peptides (AMPs) are part of the immune defense that insects have developed to protection hymnoptera against pathogens. This work was done the expression of antimicrobial peptide Abaecina of Apis mellifera in fungi Pichia pastoris. A gene containing elements for cloning, purification and termination of translation was designed based on the sequence of Apis mellifera abaecina then was optimization of codons and subsequent chemical synthesis of the gene. This gene was cloned into pUC57 and after sequencement for confirmation, then the insert was subcloned into expression vector pPIC9 and realized the transformation into Pichia pastoris. After selection of positive clones expression was induced by adding methanol. The supernatant was analyzed at different times to determine the optimum time of production of the recombinant peptide. The growth inhibition test showed that there was significant inhibition of growth of the bacterium Escherichia coli DH5α in time of 24 hours at concentrations of 10 and 25 mg of peptide. The results showed that the peptide abaecina of Apis mellifera produced in Pichia pastoris has antimicrobial activity.
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spelling 2016-06-22T18:43:47Z2012-03-072016-06-22T18:43:47Z2011-07-27LUIZ, Denis Prudêncio. Expressão heteróloga de abaecina de Apis mellifera em Pichia pastoris. 2011. 41 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2011.https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15854CHAPTER 2: Antimicrobial peptides (AMPs) are part of the immune defense that insects have developed to protection hymnoptera against pathogens. This work was done the expression of antimicrobial peptide Abaecina of Apis mellifera in fungi Pichia pastoris. A gene containing elements for cloning, purification and termination of translation was designed based on the sequence of Apis mellifera abaecina then was optimization of codons and subsequent chemical synthesis of the gene. This gene was cloned into pUC57 and after sequencement for confirmation, then the insert was subcloned into expression vector pPIC9 and realized the transformation into Pichia pastoris. After selection of positive clones expression was induced by adding methanol. The supernatant was analyzed at different times to determine the optimum time of production of the recombinant peptide. The growth inhibition test showed that there was significant inhibition of growth of the bacterium Escherichia coli DH5α in time of 24 hours at concentrations of 10 and 25 mg of peptide. The results showed that the peptide abaecina of Apis mellifera produced in Pichia pastoris has antimicrobial activity.CAPITULO 2: Peptídeos antimicrobianos (AMPs) fazem parte da defesa imune que os insetos apresentam para proteção contra patógenos. Nesse trabalho foi feito a expressão do peptídeo antimicrobiano abaecina do himenóptero Apis mellifera em levedura Pichia pastoris. Foi desenhado um gene contendo elementos para clonagem, purificação e término de tradução baseado na sequência de abaecina de Apis mellifera seguido de otimização de códons e posterior síntese química do gene. Esse gene foi clonado em pUC57 e após sequenciamento para confirmação, o inserto foi subclonado em vetor de expressão pPIC9 e transformado em Pichia pastoris. Após seleção de clones positivos, a expressão foi induzida por adição de metanol. O sobrenadante foi analisado em diferentes tempos para determinação do tempo ótimo de produção do peptídeo recombinante. A análise da atividade inibitória de crescimento mostrou que houve inibição significativa do crescimento da bactéria Escherichia coli no tempo de 24 hora nas concentrações de 10 e 25 μg de peptídeo. Os resultados mostram que o peptídeo abaecina de Apis mellifera produzido em Pichia pastoris tem atividade antimicrobiana.Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisMestre em Genética e Bioquímicaapplication/pdfporUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em Genética e BioquímicaUFUBRCiências BiológicasAbaecinaPichia pastorisApis melliferaExpressão heterólogaAbelha - GenéticaAbaecinHeterologous expressionCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICAExpressão heteróloga de abaecina de Apis mellifera em Pichia pastorisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisUeira-Vieira, Carloshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4706664A7Bonetti, Ana Mariahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783660P9Machado, Luiz Fernando Almeidahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4266917A2Luiz, Denis Prudêncio81763055info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUTHUMBNAILdiss denis.pdf.jpgdiss denis.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1243https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15854/3/diss%20denis.pdf.jpgaf88c874041d84aaa4f1403773bb1718MD53ORIGINALdiss denis.pdfapplication/pdf896558https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15854/1/diss%20denis.pdfce066e06310ce297528ea78a13f926d1MD51TEXTdiss denis.pdf.txtdiss denis.pdf.txtExtracted texttext/plain54542https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15854/2/diss%20denis.pdf.txtf9be5c3b32977480c7aec8fd4697ad2bMD52123456789/158542021-11-03 09:07:46.628oai:repositorio.ufu.br:123456789/15854Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-11-03T12:07:46Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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