Desenvolvimento de imunossensor para detecção do hormônio tireoidiano L-triiodotironina (L-T3)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2017
Autor(a) principal: Silva, Heliane Sousa da lattes
Orientador(a): Madurro, João Marcos lattes
Banca de defesa: Pereira, Arnaldo César lattes, Melo, Edmar Isaías de lattes, Naal, Zeki lattes, Nossol, Edson lattes
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Química
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Área do conhecimento CNPq:
Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/20565
http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2018.11
Resumo: Neste trabalho foi desenvolvido uma plataforma funcionalizada com o nanocompósito polimérico óxido de grafeno reduzido/politiramina (OGre/PTir) sobre eletrodo de grafite (EG), para detecção de L-triiodotironina (L-T3), um dos hormônios tireoidianos. A plataforma EG/OGre/PTir foi caracterizada por meio de voltametria cíclica, AFM, MEV e por FT-IR. Após a caracterização, o anticorpo foi imobilizado na superfície da matriz EG/OGre/PTir e foram padronizadas as melhores condições para a imobilização da sonda, tais como: concentração, tempo de interação da sonda com a plataforma e pH, obtendo-se os seguintes valores: 6,0 ng mL-1; 45 minutos e 7,46 respectivamente. Para bloqueio da superfície, utilizou-se solução de BSA a 0,5% e, logo após o alvo L-T3 foi gotejado na superfície do eletrodo. A detecção direta do anti L-T3 e do L-T3 foi realizada por meio de voltametria de pulso diferencial. Foi possível observar que o alvo (L-T3) é eletroativo na plataforma desenvolvida, apresentando um pico de oxidação em 0,6 V de pequena intensidade de corrente. Quando o L-T3 interage com a sonda, formando o complexo anticorpo-antígeno, ocorre um deslocamento de potencial para 0,7 V e, simultaneamente, ocorre um aumento de intensidade de corrente elétrica, indicando que realmente houve a interação. Foi construída uma curva de calibração, com faixa linear de resposta de 0,001ng mL-1 a 5,0 ng mL-1 de L-T3, com R2 = 0,997342. O biossensor foi caracterizado morfologicamente por meio de imagens de AFM e MEV. Foi possível observar que houve mudanças morfológicas à medida que se adicionou a sonda, BSA e alvo (L-T3) sobre a plataforma EG/OGre/PTir. Estes resultados são promissores no desenvolvimento do imunossensor, uma vez que a concentração de analito detectada, que foi de 0,001ng mL-1, é menor do que a concentração do hormônio (L-T3) existente no sangue humano ([L-T3total] =0,6 ng mL-1 a 1,81 ng mL-1). Palavras-chave: Óxido de grafeno reduzido, politiramina, nanocompósito, eletropolimerização, imunossensor, L-triiodotironina, tireoide.
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Após a caracterização, o anticorpo foi imobilizado na superfície da matriz EG/OGre/PTir e foram padronizadas as melhores condições para a imobilização da sonda, tais como: concentração, tempo de interação da sonda com a plataforma e pH, obtendo-se os seguintes valores: 6,0 ng mL-1; 45 minutos e 7,46 respectivamente. Para bloqueio da superfície, utilizou-se solução de BSA a 0,5% e, logo após o alvo L-T3 foi gotejado na superfície do eletrodo. A detecção direta do anti L-T3 e do L-T3 foi realizada por meio de voltametria de pulso diferencial. Foi possível observar que o alvo (L-T3) é eletroativo na plataforma desenvolvida, apresentando um pico de oxidação em 0,6 V de pequena intensidade de corrente. Quando o L-T3 interage com a sonda, formando o complexo anticorpo-antígeno, ocorre um deslocamento de potencial para 0,7 V e, simultaneamente, ocorre um aumento de intensidade de corrente elétrica, indicando que realmente houve a interação. Foi construída uma curva de calibração, com faixa linear de resposta de 0,001ng mL-1 a 5,0 ng mL-1 de L-T3, com R2 = 0,997342. O biossensor foi caracterizado morfologicamente por meio de imagens de AFM e MEV. Foi possível observar que houve mudanças morfológicas à medida que se adicionou a sonda, BSA e alvo (L-T3) sobre a plataforma EG/OGre/PTir. Estes resultados são promissores no desenvolvimento do imunossensor, uma vez que a concentração de analito detectada, que foi de 0,001ng mL-1, é menor do que a concentração do hormônio (L-T3) existente no sangue humano ([L-T3total] =0,6 ng mL-1 a 1,81 ng mL-1). Palavras-chave: Óxido de grafeno reduzido, politiramina, nanocompósito, eletropolimerização, imunossensor, L-triiodotironina, tireoide.In this work was developed a functionalized polymer nanocomposite platform with reduced graphene oxide/poly-tyramine (rGO/Poly-Tyr) deposited on graphite electrode to L-triiodothyronine detection (L-T3), a thyroid hormone. Initially, the GE/rGO/Poly-Tyr electrochemically platform was characterized by cyclic voltammetry, morphologically by AFM and SEM images and by FT-IR. After characterization, the antibody was immobilized on the surface of the matrix GE/ rGO/ Poly-Tyr and were standardized optimum conditions for immobilization of the probe, such as concentration, probe interaction time with the platform and pH, giving the following values: 6.0 ng mL-1; 45 minutes and 7.46 respectively. For blocking surface BSA solution was used at 0.5% and, after the L-T3 target was dripped on the electrode surface. The direct detection of anti L-T3 and L-T3 was performed by differential pulse voltammetry. It was observed that the target (L-T3) is electroactive in the platform developed, showing an oxidation peak at 0.6 V of low intensity current. When the L-T3 interacts with the probe, forming the antibody-antigen complex, a potential shift occurs at 0.7 V, and simultaneously there is an increase in intensity of electrical current, indicating that there was indeed the interaction. A calibration curve was constructed with linear response range of 0.001 ng mL-1 to 5.0 ng mL-1 L-T3, with R2 = 0.997342. The biosensor was characterized morphologically by AFM and SEM images. It was observed that there were morphological changes as it added the probe, BSA and target (L-T3) on the EG / ogre / PTir platform. These results are promising in the development of the immunosensor, once the analyte concentration detected, which was 0.001ng/mL is lower than the concentration of hormone (L-T3) exists in human blood ([L-T3total ] = 0.6 ng mL-1 to 1.81 ng mL-1). Keywords: reduced graphene oxide, poly-tyramine, nanocomposite, electropolymerization, immunosensor, L-triiodothyronine, thyroid.FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisTese (Doutorado)porUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em QuímicaBrasilCNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ORGANICACNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ANALITICAÓxido de grafeno reduzidoPolitiraminaNanocompósitoEletropolimerizaçãoImunossensorL-triiodotironinaTireoideDesenvolvimento de imunossensor para detecção do hormônio tireoidiano L-triiodotironina (L-T3)Development of immunosensor for detection of thyroid hormone L-triiodothyronine (L-T3)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisBrito-Madurro, Ana Gracihttp://lattes.cnpq.br/7296504571151719Madurro, João Marcoshttp://lattes.cnpq.br/3084687587967112Pereira, Arnaldo Césarhttp://lattes.cnpq.br/4416308592967165Melo, Edmar Isaías dehttp://lattes.cnpq.br/7960282543025449Naal, Zekihttp://lattes.cnpq.br/5524300183008573Nossol, Edsonhttp://lattes.cnpq.br/9330436454964901http://lattes.cnpq.br/3330347210394451Silva, Heliane Sousa da84cfc6af78-95df-434f-8cba-ff3aa9588d23info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUORIGINALDesenvolvimentoDeImunossensor.pdfDesenvolvimentoDeImunossensor.pdfTeseapplication/pdf4814713https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/20565/3/DesenvolvimentoDeImunossensor.pdf586dcd66309968db1b61f1f0a14ca7fcMD53LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81792https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/20565/4/license.txt48ded82ce41b8d2426af12aed6b3cbf3MD54TEXTDesenvolvimentoDeImunossensor.pdf.txtDesenvolvimentoDeImunossensor.pdf.txtExtracted texttext/plain146040https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/20565/5/DesenvolvimentoDeImunossensor.pdf.txt4cd77051b920826ac0c1a64559046523MD55THUMBNAILDesenvolvimentoDeImunossensor.pdf.jpgDesenvolvimentoDeImunossensor.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1316https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/20565/6/DesenvolvimentoDeImunossensor.pdf.jpg13cab2c70c78c922f5c4df12083a9c15MD56123456789/205652020-02-27 10:17:01.137oai:repositorio.ufu.br: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Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2020-02-27T13:17:01Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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