O microRNA bta-miR-425-5p adquirido pelo espermatozoide durante o processo de maturação no epidídimo

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2024
Autor(a) principal: Rojas, Yulizabeth Daniela Pinto
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
Brasil
Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/43683
http://doi.org/10.14393/ufu.di.2024.5145
Resumo: MiRNAs play key roles in cell function through the regulation of different pathways. Sperm cells can deliver miRNAs to the oocyte modulating the embryo's future epigenetic processes. Particularly miR-425-5p, is well described as a cellular proliferation marker and is known to be present in sperm. This work aimed to determine and quantify whether bta-miR-425-5p, found in bovine sperm, originates from spermatogenesis or is incorporated during epididyma l maturation. For that bull, the testis-epididymis complex was obtained from a local slaughterhouse to obtain sperm, extracellular vesicles, and tissue samples from the testicular parenchyma, epididymal head, body, and tail from 22 testes. Samples were collected by dissection and flushing with 1xPBS. Extracellular vesicles were characterized by TEM, nanoparticle tracking analysis, and flow cytometer, in addition, the expression of bta-miR-425- 5p in extracellular vesicles, sperm, and tissue samples from different epididymal segments and the testis was quantified by RT-qPCR. The results demonstrate the presence of extracellular vesicles and differ in size and concentration for each region, the size of the extracellular vesicles decreased, the largest in the testis and smallest in the epididymal cauda, with greater concentration in the testicles than in the different regions of the epididymis. Even in quantifying the expression of bta-miR-425-5p, this was expressed in the seminiferous tubules and epididymal ducts, and significantly different expressed in the extracellular vesicles and sperm of the epididymal cauda. Overall, this work demonstrated that bta-miR-425-5p was added to spermatozoa during maturation and this aggregation could be mediated by extracellular vesicles.
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For that bull, the testis-epididymis complex was obtained from a local slaughterhouse to obtain sperm, extracellular vesicles, and tissue samples from the testicular parenchyma, epididymal head, body, and tail from 22 testes. Samples were collected by dissection and flushing with 1xPBS. Extracellular vesicles were characterized by TEM, nanoparticle tracking analysis, and flow cytometer, in addition, the expression of bta-miR-425- 5p in extracellular vesicles, sperm, and tissue samples from different epididymal segments and the testis was quantified by RT-qPCR. The results demonstrate the presence of extracellular vesicles and differ in size and concentration for each region, the size of the extracellular vesicles decreased, the largest in the testis and smallest in the epididymal cauda, with greater concentration in the testicles than in the different regions of the epididymis. Even in quantifying the expression of bta-miR-425-5p, this was expressed in the seminiferous tubules and epididymal ducts, and significantly different expressed in the extracellular vesicles and sperm of the epididymal cauda. Overall, this work demonstrated that bta-miR-425-5p was added to spermatozoa during maturation and this aggregation could be mediated by extracellular vesicles.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorCNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoDissertação (Mestrado)Os miRNAs desempenham papéis fundamentais na função celular por meio da regulação de diferentes vias. As células espermáticas podem entregar miRNAs ao oócito, modulando os futuros processos epigenéticos do embrião. Em particular, o miR-425-5p descrito como um marcador de proliferação celular e é conhecido por estar presente no esperma. Este trabalho teve como objetivo determinar e quantificar se o bta-miR-425-5p, encontrado no esperma bovino, origina-se da espermatogênese ou é incorporado durante a maturação epididimal. Para isso, testículos de touros foram obtidos de um abatedouro local para obter espermatozoides, vesículas extracelulares e amostras de tecido do parênquima testicular, cabeça, corpo e cauda epididimal de 22 testículos. As amostras foram coletadas por dissecação e lavagem com PBS 1X. As vesículas extracelulares foram caracterizadas por microscopia eletrônica, análise de rastreamento de nanopartículas e citômetro de fluxo. Além disso, foi quantificado a expressão de bta-miR-425-5p por RTq-PCR em vesículas extracelulares, espermatozoides e amostras de tecido do testículo e dos diferentes segmentos epididimários. Os resultados demonstram a presença de vesículas extracelulares e diferenças em tamanho e concentração para cada região. O tamanho das vesículas extracelulares diminuiu, sendo as maiores nos testículos e as menores na cauda epididimal, com maior concentração nos testículos do que nas diferentes regiões do epidídimo. Mesmo na quantificação da expressão de bta-miR-425-5p, foi expresso nos túbulos seminíferos e ductos epididimários, e significativamente diferente nas vesículas extracelula res e esperma da cauda epididimal. De maneira geral, este trabalho demonstrou que o bta-miR-425- 5p poderia ser adicionado aos espermatozoides durante a maturação e essa agregação pode ser mediada por vesículas extracelulares.Universidade Federal de UberlândiaBrasilPrograma de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural AplicadasSilveira, Juliano Coelho dahttp://lattes.cnpq.br/5755389041675506Beletti, Marcelo Emíliohttp://lattes.cnpq.br/1895300906751714Barbosa, Bellisa de Freitashttp://lattes.cnpq.br/8358599387667956Vasconcelos, André Belico dehttp://lattes.cnpq.br/835859938766795Rojas, Yulizabeth Daniela Pinto2024-10-18T21:40:25Z2024-10-18T21:40:25Z2024-09-04info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfROJAS, Yulizabeth Daniela Pinto. O microRNA bta-mir-425-5p adquirido pelo espermatozoide durante o processo de maturação no epidídimo. 2024. 66 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2024. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.di.2024.5145.https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/43683http://doi.org/10.14393/ufu.di.2024.5145porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2024-10-19T06:23:17Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/43683Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2024-10-19T06:23:17Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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description MiRNAs play key roles in cell function through the regulation of different pathways. Sperm cells can deliver miRNAs to the oocyte modulating the embryo's future epigenetic processes. Particularly miR-425-5p, is well described as a cellular proliferation marker and is known to be present in sperm. This work aimed to determine and quantify whether bta-miR-425-5p, found in bovine sperm, originates from spermatogenesis or is incorporated during epididyma l maturation. For that bull, the testis-epididymis complex was obtained from a local slaughterhouse to obtain sperm, extracellular vesicles, and tissue samples from the testicular parenchyma, epididymal head, body, and tail from 22 testes. Samples were collected by dissection and flushing with 1xPBS. Extracellular vesicles were characterized by TEM, nanoparticle tracking analysis, and flow cytometer, in addition, the expression of bta-miR-425- 5p in extracellular vesicles, sperm, and tissue samples from different epididymal segments and the testis was quantified by RT-qPCR. The results demonstrate the presence of extracellular vesicles and differ in size and concentration for each region, the size of the extracellular vesicles decreased, the largest in the testis and smallest in the epididymal cauda, with greater concentration in the testicles than in the different regions of the epididymis. Even in quantifying the expression of bta-miR-425-5p, this was expressed in the seminiferous tubules and epididymal ducts, and significantly different expressed in the extracellular vesicles and sperm of the epididymal cauda. Overall, this work demonstrated that bta-miR-425-5p was added to spermatozoa during maturation and this aggregation could be mediated by extracellular vesicles.
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