Proteoma comparativo da regi?o cambial de clones de Eucalyptus spp. e Corymbia spp. cultivados em diferentes espa?amentos

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Almeida, Kamilla Emmanu?lle Carvalho de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: UFVJM
• Palavras-chave em Português: Esp?cies florestais; Xilema; Densidade de plantio; Prote?mica
• Palavras-chave em Inglês: Shotgun; Forest species; Xylem; Density planting; Proteomics
• Link de acesso: http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/handle/1/2298

Diferen?as fenot?picas observadas entre ?rvores cultivadas em diferentes espa?amentos de plantio, no que se refere a propriedades da madeira, podem ser atribu?das a uma diferen?a no padr?o de abund?ncia de prote?nas no xilema secund?rio. Para entender em n?vel molecular como o espa?amento afeta o crescimento e a forma??o da madeira de um hibrido tri-cross de Eucalyptus urophylla S.T. Blake x (E. camaldulensis Dehn x E. grandis Hill ex Maiden) e de um h?brido de Corymbia citriodora (Hook) K. D. Hill & L. A. Johnson x C. torelliana (F. Muell) K. D. Hill & L. A. Johnson, uma abordagem prote?mica foi empregada neste trabalho. Para isso, amostras do tecido cambial foram coletadas de clones, com 24 meses de idade, cultivados em quatro diferentes espa?amentos (3 x 3 m, 3 x 1 m, 6 x 1,5 m e 6 x 0,5 m). Diferentes protocolos foram comparados para extra??o das prote?nas, sendo eles os m?todos baseados no uso de TCA/acetona, TCA/acetona/fenol e solu??o tamp?o/fenol/acetato de am?nio em metanol. As prote?nas totais do tecido cambial foram separadas mediante eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de s?dio (SDS-PAGE). Afim de promover um ensaio sensitivo e acurado, a prote?mica do tipo ?shotgun? (nLC-MS/MSOrbitrap) foi a estrat?gia adotada. Para a identifica??o de prote?nas, foram utilizados bancos de dados p?blicos de Eucalyptus grandis. As prote?nas identificadas nos bancos de dados, quando n?o caracterizadas, foram funcionalmente anotadas com base na similaridade com sequ?ncias anotadas no UniRef90, usando o Sma3s. Por fim, as prote?nas com diferen?a significativa (p<0,05) diferencialmente reguladas (fold-change entre 2 e 0,5) foram funcionalmente categorizadas usando a ferramenta MERCATOR-MapMan. Al?m disso, esse grupo de prote?nas foi mapeado nos processos biol?gicos da base de dados Kegg. De modo geral, prote?nas extra?das com solu??o tamp?o combinada com fenol e precipitadas com acetato de am?nio em metanol apresentaram melhor qualidade, alto rendimento e bandas com melhores intensidades, em compara??o com os outros m?todos de extra??o, sendo este o m?todo de extra??o usado. A an?lise eletrofor?tica unidimensional revelou altera??es no perfil proteico do c?mbio vascular dos clones de Eucalyptus e Corymbia submetidos a diferentes espa?amentos de plantio. A estrat?gia de prote?mica ?shotgun? identificou 2547 esp?cies proteicas, das quais 1484 apresentaram diferen?as significativas e mudan?as qualitativas ou quantitativas em resposta a clones e espa?amentos de plantio. A an?lise estat?stica das prote?nas identificadas e dos processos biol?gicos relacionados revelaram um comportamento diferente nos clones em rela??o ? abund?ncia de suas prote?nas indicando um poss?vel ajuste metab?lico em fun??o das condi??es ambientais proporcionadas pelos espa?amentos de plantio avaliados que refletiu nas caracter?sticas da madeira das referidas esp?cies.