Efeito dos extratos etanólicos de partes aéreas e de raízes de Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato sobre ativação e proliferação de linfócitos, in vitro

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2018
Autor(a) principal: Santos, Michaelle Geralda dos
Orientador(a): Melo, Gustavo Eustáquio Brito Alvim de
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: UFVJM
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Link de acesso: https://acervo.ufvjm.edu.br/items/5fdeb43f-07f6-4f4a-ba15-0c4b5f1c2b23
Resumo: O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001.
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Tese (Doutorado) – Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, Diamantina, 2018.https://acervo.ufvjm.edu.br/items/5fdeb43f-07f6-4f4a-ba15-0c4b5f1c2b23O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001.A Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato é uma planta nativa do Cerrado brasileiro e tem sido utilizada no Vale do Jequitinhonha pelas vias oral e tópica como antiinflamatória. Tendo em vista a escassez de estudos acerca da atividade biológica, o objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito dos extratos etanólicos de partes aéreas e de raízes de Eriosema campestre (ETEC-AE e ETEC-RA, respectivamente) sobre a ativação e proliferação de linfócitos, in vitro. Primeiramente, foi avaliada a citotoxicidade dos extratos sobre células mononucleares do sangue periférico (PBMC) humano, após 24 horas ou 5 dias de cultura, pelo método de exclusão com azul de Tripan. Concentrações não tóxicas de ETEC-AE e ETEC-RA foram utilizadas para avaliar o efeito dos extratos sobre a proliferação de linfócitos e suas subpopulações TCD4 e TCD8, pelo decaimento da fluorescência de células marcadas com VPD450, em culturas de 5 dias estimuladas pela fitohemaglutinina (PHA). Foi avaliado também o efeito dos extratos sobre a expressão de CD25, a cadeia α do receptor de IL-2 (IL-2R), bem como a produção e expressão gênica de IL-2. Os extratos inibiram a proliferação de linfócitos totais e de suas subpopulações, reduziram a produção e expressão gênica de IL-2, mas não tiveram efeito sobre a expressão de CD25. Em seguida, foi avaliada a resposta proliferativa de linfócitos adicionando-se os extratos em diferentes tempos após a ativação das culturas celulares. O efeito antiproliferativo foi mais pronunciado com a adição dos extratos até 24 horas após o estímulo, sugerindo que a inibição da resposta proliferativa por ETEC-AE e ETEC-RA ocorre devido à ação dos mesmos sobre elementos bioquímicos atuantes em etapas iniciais e tardias da fase G1 do processo de divisão dos linfócitos T. Na sequência, a análise do ciclo celular de linfócitos estimulados com PHA e tratados com os extratos vegetais revelou uma retenção dessas células na fase G1 do ciclo, o que contribui para a redução da proliferação observada anteriormente. Tendo em vista a participação de ciclinas na regulação do processo de divisão celular, foi investigado o efeito de ETEC-AE e ETEC-RA sobre a expressão gênica das ciclinas D2, D3, E, A1 e B1. Os extratos inibiram a expressão gênica da ciclina D2. Além da atividade dos extratos sobre parâmetros relacionados à proliferação celular, foi avaliado se os mesmos teriam efeito sobre a resposta efetora dos linfócitos e suas subpopulações TCD4 e TCD8, por meio da investigação da produção das citocinas IFN-γ e TNF-α em culturas estimuladas com PMA e ionomicina e tratadas com ETEC-AE ou ETEC-RA. Os extratos não tiveram efeito sobre a produção dessas citocinas. Para determinar as principais classes de metabólitos secundários presentes na planta que poderiam ser responsáveis pelos efeitos encontrados e direcionar análises químicas posteriores, foi realizada a triagem fitoquímica por meio de reações cromogênicas e de precipitação, sendo possível sugerir a presença de flavonoides, saponinas e triterpenos em partes aéreas e raízes, além de taninos em partes aéreas. Os dados obtidos indicam que ETEC-AE e ETEC-RA apresentam efeito inibitório sobre a resposta proliferativa de linfócitos e de suas subpopulações T CD4 e T CD8, sendo que este efeito parece estar associado à inibição da entrada de linfócitos T na fase S do ciclo celular devido à redução na expressão gênica da ciclina D2 e, provavelmente em vias de sinalização na fase G1 tardia. Além disso, os resultados sugerem que os extratos atuam reduzindo a produção e expressão gênica da citocina IL-2. Pode-se sugerir que substâncias da classe dos flavonoides podem ser responsáveis pelos efeitos biológicos observados conforme apontado para outras espécies do gênero Eriosema. Dessa forma, o trabalho pode explicar, pelo menos em parte, os atributos terapêuticos da planta na medicina popular.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Tese (Doutorado) – Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2018.The Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato is a plant native to the Brazilian Cerrado and has been used in the Jequitinhonha Valley via oral and topical as antiinflammatory. The objective of the present work was to investigate the effect of ethanolic extracts of aerial parts and roots of Eriosema campestre (ETEC-AE and ETEC-RA, respectively) on the activation and proliferation of lymphocytes in vitro. Firstly, the cytotoxicity of the extracts on human peripheral blood mononuclear cells (PBMC), after 24 hours or 5 days of culture, was evaluated by the Trypan blue exclusion method. Non-toxic concentrations of ETEC-AE and ETEC-RA were used to evaluate the effect of extracts on the proliferation of lymphocytes and their TCD4 and TCD8 subpopulations by the decay of fluorescence of VPD450-labeled cells in Phytohemagglutinin-stimulated 5-day cultures (PHA). The effect of the extracts on the expression of CD25, the α-chain of the IL-2 receptor (IL-2R), as well as the production and gene expression of IL-2, were also evaluated. The extracts inhibited the proliferation of total lymphocytes and their subpopulations, reduced IL- 2 production and gene expression, but had no effect on CD25 expression. Then, the proliferative response of lymphocytes was evaluated by adding the extracts at different times after the activation of the cell cultures. The antiproliferative effect was more pronounced with the addition of the extracts up to 24 hours after the stimulus, suggesting that the inhibition of the proliferative response by ETEC-AE and ETEC-RA occurs due to the acting on biochemical elements in the initial and late stages of the G1 phase of the T lymphocyte division process. In the sequence, the cell cycle analysis of PHA-stimulated lymphocytes treated with the plant extracts revealed a retention of these cells in the G1 phase of the cycle, which contributes to the reduction of the proliferation observed previously. The effect of ETEC-AE and ETEC-RA on the gene expression of cyclins D2, D3, E, A1 and B1 was investigated. The extracts inhibited the cyclin D2 gene expression. In addition to the activity of the extracts on parameters related to cell proliferation, it was evaluated whether they had an effect on the effector response of lymphocytes and their TCD4 and TCD8 subpopulations, by investigating the production of IFN-γ and TNF-α cytokines in stimulated cultures and treated with ETEC-AE or ETEC-RA. The extracts had no effect on the production of these cytokines. To determine the main classes of secondary metabolites present in the plant that could be responsible for the effects found and to direct subsequent chemical analyzes, phytochemical screening was performed through chromogenic and precipitation reactions, and it is possible to suggest the presence of flavonoids, saponins and triterpenes in aerial parts and roots, as well as tannins in aerial parts. The data obtained indicate that ETEC-AE and ETEC-RA have an inhibitory effect on the proliferative response of lymphocytes and their CD4 and CD8 T subpopulations, and this effect seems to be associated with the inhibition of T lymphocyte entry in the S phase of the cycle due to the reduction in the gene expression of cyclin D2 and probably in signaling pathways in the late G1 phase. In addition, the results suggest that the extracts act by reducing the production and gene expression of IL-2 cytokine. It may be suggested that substances of the flavonoid class may be responsible for the observed biological effects as pointed out for other species of the genus Eriosema. In this way, the work can explain, at least in part, the therapeutic attributes of the plant in popular medicine.porUFVJMA concessão da licença deste item refere-se ao à termo de autorização impresso assinado pelo autor, assim como na licença Creative Commons, com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus repositórios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, e preservação, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessEfeito dos extratos etanólicos de partes aéreas e de raízes de Eriosema campestre var. macrophyllum (Grear) Fortunato sobre ativação e proliferação de linfócitos, in vitroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisEriosema campestreProliferação celularIL-2CiclinasCell proliferationCyclinsreponame:Repositório Institucional da UFVJMinstname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)instacron:UFVJMTHUMBNAILmichaelle_geralda_santos.pdf.jpgmichaelle_geralda_santos.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2637https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/5e49757b-5e7d-4d59-ad2e-7998e88ea047/download4a1758bb6a301bd0161cbd22ea7d7a1bMD57falseAnonymousREADORIGINALmichaelle_geralda_santos.pdfmichaelle_geralda_santos.pdfapplication/pdf2339075https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/d19e50ef-2418-405a-a613-ef07523665e0/downloadbbbacc98eccc3c84fd4063beef60ffaeMD51trueAnonymousREADCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; 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