Lacases de actinobatérias: caracterização, obtenção de novos primers e expressão heteróloga na levedura Kluyveromyces marxianus UFV-3

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Fernandes, Tatiana Alves Rigamonte
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Associações micorrízicas; Bactérias láticas e probióticos; Biologia molecular de fungos de interesse; Doutorado em Microbiologia Agrícola; UFV
• Palavras-chave em Português: Actinobactérias; Lacase; Enzimas ligninolíticas; Multicobre oxidases; Actinobacteria; Laccase; Ligninolytic enzymes; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIA::FITOSSANIDADE::MICROBIOLOGIA AGRICOLA
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/1564

Dentre as enzimas multicobre oxidases, as lacases, por sua grande variedade de substratos, tem atraído atenção tanto para pesquisa básica quanto aplicada a atividades industriais e ambientais. Com relação às lacases de origem microbiana, pouco se conhece sobre aquelas produzidas por bactérias. Neste trabalho, destaca-se o filo Actinobacteria, ordem Actinomycetales, devido à sua reconhecida importância biotecnológica e sua habilidade para degradação de compostos recalcitrantes, sendo muitos deles substratos de lacases. Tendo em vista a demanda por grande volume de enzima por parte das diversas indústrias, e a dificuldade de manipulação dos produtores nativos, é sugerida aqui a expressão heteróloga de lacases de actinobactérias na levedura Kluyveromyces marxianus, em virtude das propriedades industriais que a mesma apresenta, tais como alta velocidade do crescimento, termotolerância e status Generally Regarded as Safe (GRAS). O objetivo deste trabalho foi obter uma linhagem de Kluyveromyces marxianus portando gene de lacase de actinobactéria, capaz de expressá-lo e secretar a enzima ativa; buscando- se, para isso, isolar actinobactérias produtoras de lacase a partir de solo, caracterizar a enzima, isolar um gene de lacase, clonar em vetor de expressão e, por fim, transformar K. marxianus UFV-3. A partir de dados da literatura, realizou-se uma revisão crítica relacionada ao tema, e as sequências gênicas que codificam proteínas caracterizadas foram identificadas e utilizadas na síntese de oligonucleotídeos iniciadores que se revelaram adequados para detecção e isolamento do gene neste grupo, havendo distinção de genes correspondentes a proteínas com duas estruturas distintas. Havendo o isolamento de um dos genes, o mesmo foi clonado em cassete de expressão para integração no genoma da K. marxinus UFV-3; os dados sugerem que houve sucesso na integração.