Domínios da proteína antiviral WWP1: formação de corpos nucleares e interação com proteínas pro-virais

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Breves, Sâmera de Souza
• Orientador(a): Fontes, Elizabeth Pacheco Batista
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa
• Programa de Pós-Graduação: Genética e Melhoramento
• Área do conhecimento CNPq: Genética Molecular e de Microorganismos
• Link de acesso: https://locus.ufv.br//handle/123456789/31510; https://doi.org/10.47328/ufvbbt.2023.078

A proteína WW domain-containing protein (AtWWP1) possui 463 aminoácidos e contém dois domínios de triptofano conservados que reconhecem motivos ricos em prolina (PRM) e sítios de serina/treonina-prolina fosforilados. AtWWP1 atua como proteína antiviral promovendo a translocação da proteína pro-viral citoplasmática NSP- interacting GTPase (NIG) para corpos nucleares, diminuindo o processo infeccioso contra begomovirus. A rede de interações proteína-proteína de Arabidopsis thaliana ligada ao hub imune da proteína COP9 signalosome complex subunit 5 (CSN5A) revelou que, além de NIG, AtWWP1 também se conecta com Methyl CpG binding domain 2 protein (AtMBD2), uma proteína capaz de reconhecer regiões metiladas das ilhas CpG. A proteína formadora de corpos nucleares, designada ciclina dependente de quinase 2 (CDKC2), também foi co-localizada com AtWWP1 nos corpos nucleares. Sabendo que CDKC2 fosforila a porção C-terminal (CTD) da RNA polimerase II e AtMBD2 está associado a fatores de repressão transcricional e desmetilação do DNA, levantou-se a hipótese de que os corpos nucleares formadores de AtWWP1 são transcricionalmente ativos. Para identificar como a proteína AtWWP1 interage com as proteínas CDKC2 e AtMBD2, ensaios in vitro e in planta de proteínas mutantes e truncadas de AtWWP1 foram realizados, concluindo que AtWWP1 interage com CDKC2, em leveduras, via seus domínios de triptofano conservados e com AtMBD2 via porção C-terminal in vitro e in vivo. Estudos funcionais da proteína AtMBD2 sugerem seu envolvimento no processo de infecção contra begomovirus. Inicialmente foi demonstrado que, além de participar do hub imune de CSN5A, AtMBD2 é induzida por infecção com Cabbage leaf curl virus (CabLCV) similarmente a AtWWP1 e NIG. Além disso, foi demonstrado que a superexpressão de AtMBD2 aumentou a suscetibilidade ao vírus, enquanto inativação de AtMBD2 no nocaute mbd2 – Salk 069448 diminuiu significativamente o acúmulo do DNA viral comparado com as linhagens controle, Col-0. Estes resultados indicam que AtMBD2 participa do processo de infecção viral e exibe atividade pró-viral. Como NIG, AtMBD2 não forma corpos nucleares mas é redirecionada para corpos nucleares quando expressa com AtWWP1, confirmando a atividade imune intrínseca dos corpos nucleares derivados de AtWWP1. Palavras-Chave: Domínio WW. AtWWP1. AtMBD2. Corpos nucleares. Atividade pro-viral