Expressão do peptídeo vacina SBm7462® anti-carrapato Rhipicephalus microplus em plantas transgênicas (Arabidopsis thaliana)

• Ano de defesa: 2010
• Autor(a) principal: Peconick, Ana Paula
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Biotecnologia, diagnóstico e controle de doenças; Epidemiologia e controle de qualidade de prod. de; Doutorado em Medicina Veterinária; UFV
• Palavras-chave em Português: Vacinação; Proteínas heterólogas; Plantas transgênicas; Vaccination; Heterologous proteins; Transgenic plants; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::MEDICINA VETERINARIA PREVENTIVA
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/1433

A demanda por vacinas parasitárias em saúde animal é crescente. Os prejuízos causados pela infestação de carrapatos e as doenças transmitidas pelos mesmos estão na ordem de bilhões de dólares, sendo o carrapato Rhipicephalus microplus o parasito de maior impacto econômico na pecuária do Brasil e dos países com clima tropical e subtropical. Pesquisas de ponta, aplicando ferramentas de biotecnologia, são usadas em alguns ou em todos os estágios no desenvolvimento de vacinas. A produção de proteínas heterólogas é uma promissora alternativa para a fabricação de vacinas. Os vegetais representam um dos sistemas mais econômicos para a produção em larga escala de proteínas para uso industrial e farmacêutico, o que significa utilizar as plantas como biofábricas. O objetivo do presente trabalho é produzir antígenos vacinais homólogos do peptídeo sintético SBm7462® contra o carrapato R. microplus, em plantas (Arabidopsis thaliana) transformadas com gene sintético. O gene denominado seq2, que possui a seqüência da SBm7462® repetida três vezes em tandem foi inserido em vetores de doação (pDONR201) e, em seguida, em vetores de expressão binário para plantas (pk7WG2 e o pk7FWG2), utilizando-se o sistema Gateway®. Pela seleção em meio com antibiótico e reação em cadeia de polimerase (PCR), selecionaram-se as plantas transformadas positivamente, a presença do transgene nessas foi confirmado por sequenciamento genético. As plantas transgênicas com melhor desenvolvimentoapresentaram o gene seq2 integrado ao seu genoma. Para avaliar a expressão do peptídeo recombinante foram realizadas as técnicas de RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction), imunohistoquímica e análise em microscópio confocal. As proteínas recombinantes denominadas rBm7462 foram expressas no apoplasto das células epidérmicas das folhas transgênicas. As plantas com os maiores níveis de expressão foram selecionadas para, nas próximas gerações, imunizar camundongos BALB/c. Esse é o primeiro estudo da produção de subunidades vacinais em plantas transgênicas contra um ectoparasito.