Uso de ferramentas biotecnológicas para o controle de pragas agrícolas

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2013
Autor(a) principal: Coelho, Roberta Ramos
Orientador(a): Sá, Maria Fátima Grossi de
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Link de acesso: http://repositorio.unb.br/handle/10482/18330
Resumo: Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013.
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O presente trabalho foi realizado visando o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas para o controle destas duas pragas agrícolas. No caso de A. grandis, a técnica do silenciamento gênico por RNAi foi utilizada para estudar a importância da Vitelogenina (proteína envolvida na reprodução dos insetos) para este inseto-praga. A técnica de RNAi é utilizada como ferramenta de validação funcional de genes e para o controle de pragas, e vem sendo utilizada na nova geração de plantas transgênicas. Isto em vista, no presente trabalho foram avaliados os efeitos do silenciamento gênico da vitelogenina de A. grandis (Agvtg) na biologia e no desenvolvimento do inseto adulto e da progênie. Inicialmente, foi realizado um estudo para identificar os melhores genes referência a serem utilizados em estudos gerais de qRT-PCR com este inseto. Após esta identificação, foi determinado o padrão de expressão do gene Agvtg e verificou-se a presença de transcritos em diferentes fases do desenvolvimento do inseto através de qRT-PCR. A proteína (AgVtg) foi localizada, por imunocitoquímica, em oócitos em desenvolvimento. Após microinjeção de dsRNA para Agvtg (dsVtg) em fêmeas de A. grandis, foi verificada uma significativa diminuição no acúmulo de transcritos deste gene. Além disto, verificou-se que as fêmeas tratadas com o dsVtg são capazes de produzir ovos na mesma quantidade dos tratamentos controle, porém, a maior parte dos ovos era inviável. Estudos realizados por meio de microscopia dos ovos oriundos de fêmeas tratadas com dsVtg revelaram, ainda, diferentes fenótipos, correspondentes a paralização do desenvolvimento do embrião em diferentes estágios de desenvolvimento, indicando, provavelmente, diferentes níveis desilenciamento gênico. Os estudos realizados com M. incognita, por sua vez, foram feitos utilizando uma estratégia distinta da anterior. Sabe-se que o nematoide das galhas estimula o ciclo celular das células hospedeiras das plantas, assim, foram utilizadas linhagens de plantas de Arabidopsis thaliana superexpressando proteínas inibidoras do ciclo celular de plantas (KRPs) e mutantes que não expressam estas proteínas para avaliar o efeito no ciclo de vida do patógeno. Esse trabalho nos permitiu demonstrar a possível função de KRP3, KRP5 e KRP7 em galhas induzidas por nematoides. Nossos resultados demonstram que todos os membros desta família afetam a progressão do ciclo celular durante a formação de galhas de forma diferente, afetando o ciclo de vida do nematoide. Assim, os dados gerados neste trabalho certamente contribuirão consideravelmente para o desenvolvimento de novas técnicas e ferramentas para o controle da principal praga do algodão no país, o bicudo-do-algodoeiro, e do nematoide de galhas, Meloidogyne incognita. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACTBrazil is ranked as the fifth world cotton producer, being also one of the largest fiber producers in the world, leading in high contribution to the commercial trade. Cotton is produced in monoculture system, and it is attacked by a large number of pests. The cotton boll weevil, Anthonomus grandis, is one of the most destructive pests of cotton. Also, the root-knot nematode Meloidogyne incognita is an important pest that infect many plants species including cotton. The present work was conducted to develop biotechnological tools for the control of these two agricultural pests. In the case of A. grandis, the technique of gene silencing by RNAi was used to study the importance of vitellogenin (protein involved in reproduction) for this insect pest. The RNAi technique is used as a tool for validation of gene function and pest control, and is used in the new generation of transgenic plants. The present study evaluated the effects of gene silencing of vitellogenin in A. grandis (Agvtg) in biology,development of the adult insect and its progeny. Initially, a study was conducted to identify the best reference genes to be used in general studies qRT-PCR with this insect. After, it was determined the expression pattern of Agvtg gene and the presence of transcripts at different stages of insect development was verified by qRT-PCR. The protein (AgVtg) was located by immunocytochemistry in developing oocytes. After microinjection of dsRNA for Agvtg (dsVtg) in A. grandis females, there was a significant decrease in transcripts accumulation of this gene. Furthermore, it was found that females treated with dsVtg are able to produce eggs in the same amount of control treatments, however, most of the eggs was not viable. Studies performed by microscopy of the eggs that came from females treated with dsVtg also revealed different phenotypes, corresponding to paralysis of embryo development in different stages of development, probably indicating different levels of gene silencing. Studies realized with M. incognita, were made using a different strategy from above. It is known that the root-knot nematode stimulates the cell cycle of the host cells in plants. So Arabidopsis thaliana lines overexpressing cell cycle inhibitory proteins from plants (KRPs) and also mutants which do not express these proteins were used to evaluate the effect the pathogen life cycle. This work allowed us to demonstrate the possible role of KRP3, KRP5 and KRP7 in galls induced by nematodes. Our results demonstrate that all members of this family affect cell cycle progression during gall formation differently, thus affecting the nematode life cycle. Thus, the data generated in this study will certainly contribute significantly to the development of new techniques and tools for the control of major cotton pest in the country, cotton boll weevil, and the root-knot nematode, Meloidogyne incognita.A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições:Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessUso de ferramentas biotecnológicas para o controle de pragas agrícolasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisAlgodão - doenças e pragasBicudo-do-algodoeiroPragas agrícolas - controlePragas - controle biológicoporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain779http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/18330/4/license.txt44f9328bb0f7820e8d6e696e8085687eMD54open accessORIGINAL2013_RobertaRamosCoelho.pdf2013_RobertaRamosCoelho.pdfapplication/pdf2895421http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/18330/5/2013_RobertaRamosCoelho.pdffbd31e8bf999aaf49374b591d836925bMD55open access10482/183302023-07-07 21:01:02.534open accessoai:repositorio2.unb.br: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Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2023-07-08T00:01:02Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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