Identificação e caracterização de peptídeos ativos sobre bactérias patogênicas isolados da pele do anuro Boana raniceps (Cope, 1862)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2020
Autor(a) principal: Freitas, Gabriel Gonçalves de
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Anuro
Secreção cutânea
Purificação
Peptídeos antimicrobianos
Link de acesso: https://repositorio.unb.br/handle/10482/38844
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2020.
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O presente projeto teve como objetivo isolar, purificar e caracterizar química e biologicamente peptídeos antimicrobianos presentes na secreção cutânea do anuro Boana raniceps. A secreção cutânea de B. raniceps foi fracionada por RP-HPLC empregando coluna C18 onde foram identificados e purificados sete peptídeos antimicrobianos. Os peptídeos isolados foram submetidos a sequenciamento químico por degradação de Edman e análises de similaridade revelaram que o peptídeo Br18 corresponde a um fragmento da Figainina 2 e os demais correspondem às Ranaseptinas 3, 6, 7 e 8 previamente identificadas a partir de uma biblioteca de cDNAs gerada para essa espécie. Finalmente, o peptídeo Br17 corresponde a uma nova Raniseptina com alta similaridade com as Raniseptinas 10 e 6, sendo que o peptídeo Br17 apresenta uma deleção dos dois resíduos de aminoácidos da porção N-terminal em relação às Raniseptinas citadas. Após uma avaliação preliminar, as Raniseptinas 3 e 6 foram sintetizadas quimicamente e suas propriedades antimicrobianas e hemolíticas foram avaliadas. As duas Raniseptinas sintetizadas mostraram-se bastante ativas exibindo mesmos valores de MIC sobre as bactérias Gram-negativas: E. coli (MIC = 2 μM) e K. pneumoniae (MIC = 1 μM). No caso das bactérias Gram-positivas testadas, os peptídeos mostraram-se menos ativos, sendo que a Rsp-3 exibiu valores de MIC iguais a 4 e 8 μM para S. aureus e S. epidermidis, respectivamente, enquanto a Rsp-6 mostrou-se menos efetiva sobre a bactéria S. aureus exibindo um valor de MIC igual a 32 μM. Ambos os peptídeos não foram capazes de inibir completamente o crescimento da levedura C. albicans, mesmo na maior concentração empregada (128 μM). As Raniseptinas 3 e 6 revelaram-se pouco hemolíticas, promovendo menos de 5% de hemólise nas concentrações onde a atividade antibacteriana foi relevante (entre 2 e 8 μM). O presente estudo reforça o potencial terapêutico dos peptídeos antimicrobianos presentes nas secreções cutâneas dos anuros que, quando explorados adequadamente, podem ser úteis no desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)The number of multidrug-resistant pathogenic microorganisms has been growing in recent years due to the inadequate use of currently available commercial antibiotics, making it necessary to search for new drugs that can act as antimicrobial agents. Antimicrobial peptides (AMPs) have been shown to be a promising alternative for the development of new antimicrobial drugs. The serous glands in the skin of anurans are a rich source of antimicrobial and antiparasitic peptides. This project aimed to isolate, purify and characterize chemically and biologically antimicrobial peptides present in the cutaneous secretion of the anuran Boana raniceps. The skin secretion of B. raniceps was fractionated by RP-HPLC using a C18 column where seven antimicrobial peptides were identified and purified. The isolated peptides were subjected to chemical sequencing by Edman degradation and similarity searches revealed that the peptide Br18 corresponds to a fragment of Figainin 2 and the others correspond to Ranaseptins 3, 6, 7 and 8 previously identified from a library of cDNAs generated for that species. Finally, the Br17 peptide corresponds to a new Raniseptin with high similarity to the Raniseptins 10 and 6, with the Br17 peptide showing a deletion of the two amino acid residues of the N-terminal portion in relation to the aforementioned Raniseptins. After a preliminary evaluation, Raniseptins 3 and 6 were chemically synthesized and their antimicrobial and hemolytic properties were evaluated. The two Raniseptins synthesized were shown to be very active exhibiting the same MIC values on Gram-negative bacteria: E. coli (MIC = 2 μM) and K. pneumoniae (MIC = 1 μM). In the case of the Gram-positive bacteria tested, the peptides were less active, with Rsp-3 showing MIC values of 4 and 8 μM on S. aureus and S. epidermidis, respectively, while Rsp-6 is less effective on S. aureus exhibiting a MIC value of 32 μM. Both peptides were not able to completely inhibit the growth of the yeast C. albicans, even at the highest concentration used (128 μM). Raniseptins 3 and 6 proved to be low hemolytic, promoting less than 5% of hemolysis at concentrations where antibacterial activity was relevant (between 2 and 8 μM). The present study reinforces the therapeutic potential of antimicrobial peptides present in the skin secretions of anurans which, when properly explored, can be useful in the development of new antimicrobial agents.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Programa de Pós-Graduação em Biologia AnimalCastro, Mariana de SouzaFreitas, Gabriel Gonçalves de2020-07-02T23:25:39Z2020-07-02T23:25:39Z2020-07-022020-03-05info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfFREITAS, Gabriel Gonçalves de. Identificação e caracterização de peptídeos ativos sobre bactérias patogênicas isolados da pele do anuro Boana raniceps (Cope, 1862). 2020. 66 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020.https://repositorio.unb.br/handle/10482/38844A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-01-31T17:15:25Zoai:repositorio.unb.br:10482/38844Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-01-31T17:15:25Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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