Peptídeos antimicrobianos da pele de Physalaemus cicada bokermann, 1966 (Anura, Leiuperinae) : identificação, purificação e propriedades

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2019
Autor(a) principal: Baptista, Gislene Ferreira
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Antibióticos
Antimicrobiano
Physalaemus cicada
Peptídeos antimicrobianos
Anuro - secreções cutâneas
Link de acesso: https://repositorio.unb.br/handle/10482/36817
Resumo: Dissertação (mestrado) — Fundação Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2019.
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spelling Peptídeos antimicrobianos da pele de Physalaemus cicada bokermann, 1966 (Anura, Leiuperinae) : identificação, purificação e propriedadesAntibióticosAntimicrobianoPhysalaemus cicadaPeptídeos antimicrobianosAnuro - secreções cutâneasDissertação (mestrado) — Fundação Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2019.A descoberta dos antibióticos trouxe um grande avanço para a medicina, melhorando a qualidade de vida e promovendo uma queda drástica da mortalidade por infecções microbianas. Mas o seu uso indiscriminado tem conduzido a um processo de retorno à era pré-antibióticos e, mesmo com os diversos recursos tecnológicos atualmente disponíveis, tem havido dificuldades em encontrar novos compostos antimicrobianos que possam sanar a problemática gerada pela resistência dos microrganismos aos antibióticos convencionais. Os anuros possuem glândulas em sua pele que produzem e secretam uma grande variedade de compostos bioativos como alcaloides, esteroides, aminas biogênicas, proteínas e peptídeos. Estas moléculas apresentam uma extensa gama de bioatividades, incluindo antimicrobiana, antiparisítica, imunomoduladora, antiviral e antitumoral. Os peptídeos antimicrobianos (PAMs) presentes na secreção cutânea de anuros têm sido considerados uma opção terapêutica no desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos para combater o fenômeno de multirresistência aos antibióticos convencionais. Neste trabalho, foi realizada a purificação e caracterização de quatro novos peptídeos antimicrobianos isolados da secreção cutânea do anuro Physalaemus cicada, espécie endêmica do Brasil. A secreção bruta foi obtida por estimulação elétrica moderada e submetida ao fracionamento por RP-HPLC em coluna C18. As frações eluídas que apresentaram atividade antimicrobiana no ensaio de varredura foram analisadas por MALDI-TOF MS (Autoflex II, Brüker). Quatro peptídeos antimicrobianos foram purificados e suas estruturas primárias foram determinadas por degradação de Edman: Pc24 (1GFRDNLKKIAKDMLGQIAGAVAEKLKPSQ29), Pc26.1 (1GFKDFMKNIVGKVVGAVVEKFKPSQ.NH225), Pc26.2 (1GFKDFMKNMAKNLVEKVAGAVIEKLKPSQ.NH229) e Pc28 (GLVSGIANTLSGLLGRL.NH217). Os peptídeos denominados Pc24, Pc26.1 e Pc26.2 exibiram similaridade significativa com as nattererinas, uma família de PAMs isolada do sapo Physalaemus nattereri. O peptídeo Pc28 não apresentou similaridade relevante com nenhuma das famílas de PAMs já descritas. Os PAMs Pc24 e Pc28 foram produzidos por síntese química e seus efeitos antimicrobianos foram avaliados sobre bactérias e levedura patogênicas. O peptídeo Pc24 mostrou-se ativo sobre as bactérias Gram-negativas testadas com valor de CMIs de 4 M para Escherichia coli e de 16 M para Klebsiella pneumoniae. Já o peptídeo Pc28 exibiu um espectro de ação mais abrangente, mostrando-se ativo sobre as bactérias E. coli e Staphylococcus epidermdis e sobre a levedura patogênica Candida albicans. Em conclusão, o presente trabalho resultou na purificação e caracterização parcial de quatro novos peptídeos antimicrobianos presentes na secreção da pele de P. cicada, um anuro da família Leptodactylidae, espécie endêmica do Brasil e com distribuição na região da Caatinga brasileira. Esses resultados ressaltam a importância de se expandir os estudos acerca do potencial farmacológico dos anuros da fauna brasileira, englobando espécies de outros biomas, como a Caatinga.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Rede Centro-Oeste de Pós-Graduação, Pesquisa e Inovação - REDE PRÓ-CENTRO-OESTE); Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Financiadora de Estudos e Projetos ( FINEP).The discovery of antibiotics was a major breakthrough for medicine, improving the quality of life and promoting a drastic drop in mortality from microbial infections. But its indiscriminate use has led to a process of return to the pre-antibiotic era and, even with the various technological resources currently available, there have been difficulties in finding new antimicrobial compounds that can solve the problem generated by the resistance of microorganisms to conventional antibiotics. Anurans have glands in their skin that produce and secrete a wide variety of bioactive compounds such as alkaloids, steroids, biogenic amines, proteins and peptides. These molecules have a wide range of bioactivities, including antimicrobial, antiparistic, immunomodulatory, antiviral and antitumoral. Antimicrobial peptides (AMPs) found in the cutaneous secretion of anurans have been considered a therapeutic option in the development of new antimicrobial agents to combat the phenomenon of multiresistance to conventional antibiotics. In this work, the purification and characterization of four novel antimicrobial peptides isolated from the cutaneous secretion of the anuran Physalaemus cicada, an endemic species of Brazil, was carried out. Crude secretion was obtained by moderate electrical stimulation and submitted to fractionation by RP-HPLC in a C18 column. The eluted fractions that showed antimicrobial activity in a screening assay were analyzed by MALDI-TOF MS (Autoflex II, Brüker). Four antimicrobial peptides were purified and their primary structures were determined by Edman degradation: Pc24 (1GFRDNLKKIAKDMLGQIAGAVAEKLKPSQ29) Pc26.1 (1GFKDFMKNIVGKVVGAVVEKFKPSQ.NH225) Pc26.2 (1GFKDFMKNMAKNLVEKVAGAVIEKLKPSQ.NH229) and Pc28 (1GLVSGIANTLSGLLGRL.NH217). The peptides, named Pc24, Pc26.1 and Pc26.2, exhibited remarkable similarity to nattererins, an antimicrobial peptide family isolated from the frog Physalaemus nattereri. The peptide designated Pc28 has no relevant similarity to the already described families of AMPs. The peptides Pc24 and Pc28 were produced by chemical synthesis and their antimicrobial effects were evaluated on pathogenic bacteria and yeast. Pc24 was active on Gram-negative bacteria with MIC values of 4 μM for Escherichia coli and 16 μM for Klebsiella pneumoniae. The peptide Pc28 showed a broader spectrum of action, being active on the bacteria E. coli and Staphylococcus epidermdis and on the pathogenic yeast Candida albicans. In conclusion, the present work resulted in the purification and partial characterization of four novel antimicrobial peptides found in the skin secretion of P. cicada, an anuran of the Leptodactylidae family, an endemic species of Brazil and distributed in the Brazilian Caatinga. These results highlight the importance of expanding the studies about the pharmacological potential of the anurans of the Brazilian fauna, including species of other biomes, such as Caatinga.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Programa de Pós-Graduação em Biologia AnimalCastro, Mariana de SouzaBaptista, Gislene Ferreira2020-02-05T20:34:05Z2020-02-05T20:34:05Z2020-02-052019-02-28info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfBAPTISTA, Gislene Ferreira. Peptídeos antimicrobianos da pele de Physalaemus cicada bokermann, 1966 (Anura, Leiuperinae): identificação, purificação e propriedades. 2019. xv, 47 fl., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal) — Universidade de Brasília, Brasília, 2019.https://repositorio.unb.br/handle/10482/36817A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-01-31T17:15:25Zoai:repositorio.unb.br:10482/36817Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-01-31T17:15:25Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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