Caracterização e avaliação da viabilidade, dos marcadores imunitários e diferenciação de células tronco hematopoeticas humanas criopreservadas

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2023
Autor(a) principal: Piazera, Flavia Zattar
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Células-tronco
Criopreservação de órgãos, tecidos, etc.
Fibrina Leucoplaquetária Autóloga
Link de acesso: http://repositorio.unb.br/handle/10482/48831
Resumo: Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2023.
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spelling Caracterização e avaliação da viabilidade, dos marcadores imunitários e diferenciação de células tronco hematopoeticas humanas criopreservadasCélulas-troncoCriopreservação de órgãos, tecidos, etc.Fibrina Leucoplaquetária AutólogaTese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2023.Introdução: As células tronco hematopoeticas (CTH) apresentam numerosas aplicações terapêuticas no tratamento de neoplasias hematológicas, doenças autoimunes e na medicina regenerativa. As características clínicas, bioquímicas e imunitárias dos indivíduos são fatores relevantes na qualidade da CTH coletada e criopreservada, interferindo assim nos resultados dos transplantes de células tronco hematopoéticas. Os meios de culturas e substratos de cultivo são modelos in vitro necessários para viabilizar as pesquisas experimentais e use terapêutico. Esse estudo buscou caracterizar e avaliar a viabilidade e os marcadores imunitários de CTH humanas, assim como, para avaliar o papel da fibrina leucoplaquetária (FLP) como substrato para o cultivo dessas. Métodos: Tratase de estudo descritivo e experimental conduzido com 14 amostras de CTH obtidas por aférese de 14 indivíduos adultos saudáveis. As amostras foram submetidas à tipagem para os antígenos do HLA pela técnica SSO e sistemas ABO/Rh por imunohematologia. A viabilidade e os tipos de morte regulada foram avaliados por citometria de fluxo. As espécies reativas foram avaliadas por citometria de fluxo (EROs/DCFDA; ERNs/DAFFM Diacetate). O potencial de diferenciação das CTH foi avaliado pela utilização de uma malha de fibrina como substrato; os resultados foram tabulados e analisados no programa Prism 5.0. Resultados: os doadores das CTH foram adultos jovens com parâmetros hematológicos e bioquímicos dentro dos valores normais de referência. O tempo de criopreservação de 34 ± 15 meses reduziu em 2% o total de CTH-CD34+. Houve maior expressão dos loci A*02, DRB1* 04, DRB1*07 para os antígenos HLA. Quanto ao tipo de morte celular regulada não houve diferença entre os percentuais de apoptose inicial, apoptose tardia e por mecanismo desconhecido. Quanto ao sistema ABO houve predomínio do tipo O (6 indivíduos), seguido pelo tipo A (5 indivíduos). Para o fator Rh houve predomínio do tipo positivo (10 indivíduos). Posteriormente à criopreservação houve grande variabilidade individual na produção de espécies reativas e maior produção de ERNs do que EROs pelo conjunto dos indivíduos. O uso da malha de fibrina favoreceu a antecipação do agrupamento celular (homing / 2 dias de incubação), enquanto na ausência da fibrina o agrupamento foi observado com 3 dias. A malha de fibrina favoreceu o surgimento de sinais de diferenciação celular (pseudópodes e nucléolo evidente) com 3 dias de incubação. Conclusão: O conjunto dos resultados mostraram que os parâmetros da criopreservação das CTH devem ser considerados para garantir a sua qualidade, pois houve redução na viabilidade das células quando descongeladas e algumas amostras tiverem metabolismo mitocondrial próximo de 0 (zero). Considerando que a malha de fibrina rica em plaquetas, proporcionou a adesão, o homing e os sinais de diferenciação celular, acredita-se que os parâmetros relacionados ao método de congelamento/descongelamento e ao tempo de criopreservação foram apropriados para garantir a qualidade das amostras de CTH. No entanto, sugere-se a continuidade dos estudos para determinar o efeito a curva de tempo x qualidade das células para auxiliar a tomada de decisão dos bancos nacionais de criopreservação de células tronco.Introduction: Hematopoietic stem cells (HSC) have numerous therapeutic applications in the treatment of hematologic malignancies, autoimmune diseases and in regenerative medicine. The clinical, biochemical and immunological characteristics of individuals are relevant factors in the quality of HSC collected and cryopreserved, thus interfering with the results of hematopoietic stem cell transplants. Culture media and culture substrates are in vitro models necessary to enable experimental research and therapeutic use. This study aimed to characterize and evaluate the viability and immune markers of human HSC, as well as to evaluate the role of platelet-rich fibrin (PRF) as a substrate for their cultivation. Methods: This is descriptive and experimental study conducted with 14 HSC samples obtained by apheresis from 14 healthy adult individuals. The samples were submitted to typing for HLA antigens by the SSO technique and ABO/Rh systems by immunohematology. Viability and types of regulated killing were assessed by flow cytometry. Reactive species were evaluated by flow cytometry (ROS/DCFDA; ERNs/DAFFM Diacetate). HSC differentiation potential was evaluated using a PRF as substrate; the results were tabulated and analyzed using the Prism 5.0 program. Results: HSC donors were young adults with hematological and biochemical parameters within normal reference values. The cryopreservation time of 34 ± 15 months reduced in 2% the total HSC-CD34+. There was greater expression of the A*02, DRB1*04, DRB1*07 loci for HLA antigens. As for the type of regulated cell death, there was no difference between the percentages of initial apoptosis, late apoptosis and by unknown mechanism. As for the ABO system, there was a predominance of type O (6 individuals), followed by type A (5 individuals). For the Rh factor there was a predominance of the positive type (10 individuals). After cryopreservation, there was great individual variability in the production of reactive species and greater production of ERNs than ROS by the group of individuals. The fibrin mesh favored the anticipation of cell grouping (homing / 2 days of incubation), while in the absence of fibrin, grouping was observed after 3 days. The fibrin mesh favored the appearance of signs of cell differentiation (pseudopods and evident nucleolus) after 3 days of incubation. Conclusion: The set of results showed that HSC cryopreservation parameters should be considered to ensure their quality, as there was a reduction in cell viability when thawed and some samples had mitochondrial metabolism close to 0 (zero). Considering that, the PRF mesh provided adhesion, homing and cell differentiation signals, it is believed that the parameters related to the freezing/thawing method and the cryopreservation time were appropriate to guarantee the quality of the samples. However, it is suggested the continuity of studies to determine the effect of the curve of time x cell quality to help the decision making of national banks of stem cell cryopreservation.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Ciências MédicasKückelhaus, Selma Aparecida SouzaPiazera, Flavia Zattar2024-07-13T00:05:10Z2024-07-13T00:05:10Z2024-07-122023-03-18info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfPIAZERA, Flavia Zattar. Caracterização e avaliação da viabilidade, dos marcadores imunitários e diferenciação de células tronco hematopoeticas humanas criopreservadas. 2023. 84 f., il. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.http://repositorio.unb.br/handle/10482/48831porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2025-02-27T18:04:46Zoai:repositorio.unb.br:10482/48831Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2025-02-27T18:04:46Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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