Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2007
Autor(a) principal: Corrêa, Roberto Franco Teixeira
Orientador(a): Ribeiro, Bergmann Morais, Monnerat, Rose Gomes
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Link de acesso: http://repositorio.unb.br/handle/10482/3412
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007.
id UNB_d7428a4a91860f1ce8c8d6a1b8c04940
oai_identifier_str oai:repositorio2.unb.br:10482/3412
network_acronym_str UNB
network_name_str Repositório Institucional da UnB
repository_id_str
spelling Corrêa, Roberto Franco TeixeiraRibeiro, Bergmann MoraisMonnerat, Rose Gomes2010-01-25T21:04:50Z2010-01-25T21:04:50Z2007-06-142007-06-14CORRÊA, Roberto Franco Teixeira. Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes. 2007. 84 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2007.http://repositorio.unb.br/handle/10482/3412Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007.Os genes cry4Aa e cry4Ba, pertencentes a diferentes estirpes brasileiras de Bacillus thuringiensis, S1806 e S1989, respectivamente, foram amplificados por PCR e clonados em um vetor de clonagem. A análise do seqüenciamento do gene cry4Aa mostrou alta identidade com outras seqüências do gene já descritas e este foi clonado tanto no vetor de transferência pSynXIVVI+X3, como no pFastBac®1 para expressão e análise da toxicidade da proteína heteróloga a partir dos baculovírus construídos por recombinação homóloga, vSyncry4Aa, e por transposição sítio-específica, vBacCry4Aa. O gene cry4Ba foi introduzido no vetor pSynXIVVI+X3 dando origem, por recombinação homóloga, ao baculovírus recombinante vSyncry4Ba. Os vírus recombinantes, derivados de recombinação homóloga, foram isolados em placas de 96 poços, enquanto o vírus recombiante obtido por transposição foi isolado de colônias de células de Escherichia coli DH10BacTM crescidas em placas de Petri contendo antibióticos, X-Gal e IPTG. Células de inseto BTI-TN5B1-4 foram infectadas com os vírus recombinantes isoladamente e mRNA derivados dos extratos celulares (72 h.p.i.) analisados por RT-PCR, para confirmação da expressão e presença de transcritos específicos para os genes. Extratos de larvas de Spodoptera frugiperda, infectadas com os vírus recombinantes (120 h.p.i.) foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), mostrando a presença de bandas de aproximadamente 128 e 130 kDa correspondentes aos tamanhos das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba, respectivamente. Possíveis cristais das proteínas recombinantes foram observados por microscopia de luz. Bioensaios com os extratos de insetos infectados mostraram-se tóxicos para larvas de segundo instar de Aedes aegypti. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTThe cry4Aa and cry4Ba genes from Brazilian strains of Bacillus thuringiensis, S-1806 and S-1989, respectively, were amplified by PCR, cloned into a plasmid cloning vector and sequenced. Sequence analysis of the cry4Aa gene showed high identity to previous known cry genes and it was cloned into both pSynXIVVI+X3 and pFastBac®1 transfer vectors for expression and toxicity analysis of the heterologous proteins derived from the recombinant baculoviruses constructed by homologous recombination (vSynCry4Aa) and transposition (vBacCry4Aa). The cry4Ba gene was introduced into the transfer vector pSynXIVVI+X3/3 resulting in the construction of the recombinant virus vSynCry4Ba by homologous recombination. The recombinant viruses, derived from homologous recombination, were isolated by serial dilution in 96 well plates while the recombinant virus produced by transposition was isolated from Escherichi coli (DH10BacTM) colonies grown on Petri dishes containing antibiotics, X-Gal and IPTG. Insect cells BTI-TN5B1-4 were separetly infected with the recombinante viruses and mRNA from cell extracts (72 h.p.i.) analysed by RT-PCR, in order to confirm the presence of the genes specific transcripts. Recombinant viruses infected insect extracts (120 h p.i.) were analysed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showing the presence of polypepitide bands of around 128 and 130 kDa, corresponding, respectively to the sizes of the proteins Cry4Aa and Cry4Ba. Putative crystals from the recombinant proteins were observed by light microscopy. Bioassays with virus-infected insect extracts were shown to be toxic to second instar Aedes aegypti larvae.Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisBacillus thuringiensisAedes aegyptiBaculovirosesToxicologia genéticaBRAinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2007_RobertoFTCorrea.pdf2007_RobertoFTCorrea.pdfapplication/pdf4112592http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/3412/1/2007_RobertoFTCorrea.pdf52046698f69dc6f05f1105cdddeed69dMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain1874http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/3412/2/license.txt68bc214464483469cab88ea90e65793eMD52open accessTEXT2007_RobertoFTCorrea.pdf.txt2007_RobertoFTCorrea.pdf.txtExtracted texttext/plain150720http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/3412/3/2007_RobertoFTCorrea.pdf.txt4d7bf5aefc4c1081601f0699c8a0581cMD53open access10482/34122023-07-13 15:07:37.195open accessoai:repositorio2.unb.br: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Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2023-07-13T18:07:37Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.en.fl_str_mv Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
title Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
spellingShingle Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
Corrêa, Roberto Franco Teixeira
Bacillus thuringiensis
Aedes aegypti
Baculoviroses
Toxicologia genética
title_short Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
title_full Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
title_fullStr Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
title_full_unstemmed Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
title_sort Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes
author Corrêa, Roberto Franco Teixeira
author_facet Corrêa, Roberto Franco Teixeira
author_role author
dc.contributor.author.fl_str_mv Corrêa, Roberto Franco Teixeira
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Ribeiro, Bergmann Morais
Monnerat, Rose Gomes
contributor_str_mv Ribeiro, Bergmann Morais
Monnerat, Rose Gomes
dc.subject.keyword.en.fl_str_mv Bacillus thuringiensis
Aedes aegypti
Baculoviroses
Toxicologia genética
topic Bacillus thuringiensis
Aedes aegypti
Baculoviroses
Toxicologia genética
description Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007.
publishDate 2007
dc.date.submitted.none.fl_str_mv 2007-06-14
dc.date.issued.fl_str_mv 2007-06-14
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2010-01-25T21:04:50Z
dc.date.available.fl_str_mv 2010-01-25T21:04:50Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.citation.fl_str_mv CORRÊA, Roberto Franco Teixeira. Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes. 2007. 84 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2007.
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://repositorio.unb.br/handle/10482/3412
identifier_str_mv CORRÊA, Roberto Franco Teixeira. Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes. 2007. 84 f. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2007.
url http://repositorio.unb.br/handle/10482/3412
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Repositório Institucional da UnB
collection Repositório Institucional da UnB
bitstream.url.fl_str_mv http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/3412/1/2007_RobertoFTCorrea.pdf
http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/3412/2/license.txt
http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/3412/3/2007_RobertoFTCorrea.pdf.txt
bitstream.checksum.fl_str_mv 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d
68bc214464483469cab88ea90e65793e
4d7bf5aefc4c1081601f0699c8a0581c
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1801864562757074944

Registros relacionados