Formação de biofilme e outros fatores patogênicos de S. Aureus e demais bactérias cocos gram-positivas isoladas de queijos minas frescal artesanalmente produzidos e comercializados no DF

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2024
Autor(a) principal: Oliveira, Yonara Silva Garcia de
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Bactérias gram-positivas
Staphylococcus aureus
Virulência
Biofilme
Resistência antimicrobiana
Link de acesso: http://repositorio.unb.br/handle/10482/51274
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2024.
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spelling Formação de biofilme e outros fatores patogênicos de S. Aureus e demais bactérias cocos gram-positivas isoladas de queijos minas frescal artesanalmente produzidos e comercializados no DFBactérias gram-positivasStaphylococcus aureusVirulênciaBiofilmeResistência antimicrobianaDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2024.A presença de microrganismos patogênicos como o Staphylococcus aureus é responsável por ocasionar diversos prejuízos significativos na bovinocultura leiteira e na indústria de laticínios, devido a seus inúmeros fatores de virulência, como a formação de biofilme e resistência antimicrobiana. Biofilmes são agregados estruturados de microrganismos embebidos em uma matriz de polímeros extracelulares que se aderem a superfícies bióticas ou abióticas. A formação de biofilme por bactérias é um importante fator de virulência e a sua produção está amplamente relacionada a presença de bactérias estafilocócicas e outras cocos Gram-positivas na indústria de laticínios e produção animal. A contaminação bacteriana em queijos tipo Minas frescal é facilitada por diversos fatores. Na produção artesanal utiliza-se leite cru, que sob práticas operacionais inadequadas de higiene de equipamentos das indústrias de laticínios e na presença de mastite bovina, pode conter ainda maior carga de microrganismos potencialmente patogênicos. O objetivo da pesquisa foi determinar a presença de S. aureus e outras bactérias cocos Gram-positivas em queijos Minas frescal produzidos de modo artesanal adquiridos na região do DF, identificar seus fatores de virulência como a capacidade de formação de biofilme in vitro, correlacionando com demais fatores de patogenicidade pesquisados, dentre eles a resistência a antimicrobianos. Foram analisadas 20 amostras de queijos Minas frescal do tipo artesanal e fracionado. A pesquisa envolveu cultura em ágar sangue e em meios seletivos; visualização por microscopia óptica; testes laboratoriais bioquímicos; teste laboratorial de Coagulase em lâmina; teste de Difusão em Disco para antibiograma; análise de formação de biofilme pelos métodos de adesão em microplaca (com 24 e 48h) e ágar vermelho Congo (CRA); e técnicas moleculares de PCR para identificação de genes nuc e blaZ. De dez amostras foram isoladas onze cepas de bactérias cocos Gram-positivas: quatro Staphylococcus spp., quatro S. aureus (confirmados pela determinação do gene nuc), um Enterococcus spp. e dois Streptococcus spp. Dois S. aureus foram positivos para a presença do gene blaZ e dois foram considerados coagulase-positivos pelo teste fenotípico de Coagulase; dois S. aureus e um Staphylococcus spp. foram resistentes à penicilina G no teste de Difusão em Disco, assim como os dois Streptococcus spp. O Enterococcus spp. foi resistente a vários antibióticos, exceto aos beta-lactâmicos. A capacidade de formar biofilme pelo método CRA foi positiva para dois S. aureus, um Staphylococcus spp., o Enterococcus spp. e para os dois Streptococcus spp. Pelo método de adesão em microplaca em 24h, com exceção do Enterococcus spp. que apresentou como moderada, os demais apresentaram forte capacidade de produzirem biofilme; e com 48h, a capacidade diminuiu para alguns microrganismos. A presença do gene nuc é um marcador genético específico para a identificação de Staphylococcus aureus, auxiliando na confirmação de alguns desta espécie isolados dos queijos deste estudo; dois deles apresentaram o gene blaZ que está ligado à resistência a antibióticos beta-lactâmicos. A resistência à penicilina G foi observada fenotipicamente por alguns microrganismos e todos os estafilococos foram considerados como fortes na habilidade em formar biofilme. Apesar desta relação, o tamanho amostral foi pequeno para correlacionar fatores de virulência bacterianos encontrados, como a produção de biofilme, com a resistência antimicrobiana. Entretanto estudos recentes relatam tal associação e, com isso, dificuldades no tratamento de bovinos acometidos com mastite e a persistência e recorrência desta infeção, além de propiciar a contaminações de produtos lácteos levando a prejuízos das indústrias de laticínios, da produção animal e ao risco à segurança alimentar dos consumidores. O estudo forneceu base para a compreensão da habilidade de bactérias cocos Gram-positivas em produzir biofilmes, estudos in vivo e maior número de amostras, além de técnicas moleculares de avaliação de formação de biofilme e resistência antimicrobiana, seriam necessários para conclusão do grau de patogenicidade de microrganismos isolados de queijos Minas frescal artesanalmente produzidos e vendidos no DF. Esta pesquisa reflete a atenção que deve ser dada a melhores condições sanitárias em instalações de bovinocultura leiteira e de produção de laticínios, onde boas práticas de higiene de pequenos produtores e funcionários de fazendas e de comércios e feiras locais se fazem mais necessárias.The presence of pathogenic microorganisms such as Staphylococcus aureus is responsible for causing significant losses in dairy farming and the dairy industry, due to its numerous virulence factors, such as biofilm formation and antimicrobial resistance. Biofilms are structured aggregates of microorganisms embedded in a matrix of extracellular polymers that adhere to biotic or abiotic surfaces. Biofilm formation by bacteria is an important virulence factor and its production is largely related to the presence of staphylococcal bacteria and other Gram-positive cocci in the dairy industry and animal production. Bacterial contamination in Minas fresh cheeses is facilitated by several factors. In artisanal production, raw milk is used, which under inadequate operational hygiene practices of dairy industry equipment and in the presence of bovine mastitis, may contain an even higher load of potentially pathogenic microorganisms. The objective of the research was to determine the presence of S. aureus and other Grampositive cocci bacteria in artisanally produced Minas Frescal cheeses purchased in the DF region, identify their virulence factors such as the capacity to form biofilm in vitro, correlating them with other pathogenicity factors studied, including antimicrobial resistance. 20 samples of Minas fresh cheeses of artisanal and fractionated types were analyzed. The research involved culture in blood agar and selective media; visualization by optical microscopy; biochemical laboratory tests; laboratory coagulase test on slide; disk diffusion test for antibiogram; analysis of biofilm formation by adhesion methods in microplate (with 24 and 48h) and Congo red agar (CRA); and molecular PCR techniques for identification of nuc and blaZ genes. Eleven strains of Gram-positive cocci bacteria were isolated from ten samples: four Staphylococcus spp., four S. aureus (confirmed by determination of the nuc gene), one Enterococcus spp. and two Streptococcus spp. Two S. aureus were positive for the presence of the blaZ gene and two were considered coagulase-positive by the Coagulase phenotypic test; two S. aureus and one Staphylococcus spp. were resistant to penicillin G in the disk diffusion test, as were the two Streptococcus spp. The Enterococcus spp. was resistant to several antibiotics, except betalactams. The ability to form biofilm by the CRA method was positive for two S. aureus, one Staphylococcus spp., one Enterococcus spp. and for the two Streptococcus spp. Using the adhesion method in microplates in 24 hours, with the exception of Enterococcus spp., which showed moderate adhesion, the others showed a strong capacity to produce biofilm; and after 48 hours, the capacity decreased for some microorganisms. The presence of the nuc gene is a specific genetic marker for the identification of Staphylococcus aureus, it helps to confirm some of this species isolated from the cheeses in this study; Two of them reported the blaZ gene, which is linked to resistance to beta-lactam antibiotics. Resistance to penicillin G was observed phenotypically by some microorganisms, and all staphylococci were considered strong in the ability to form biofilm. Despite this relationship, the sample size was small to correlate bacterial virulence factors found, such as biofilm production, with antimicrobial resistance. However, recent studies report such an association and, with it, losses in the treatment of cattle affected by mastitis and the persistence and recurrence of this infection, in addition to leading to contamination of dairy products, causing losses in dairy products, animal production and risk to food safety for consumers. This study provided a basis for understanding the ability of Grampositive cocci bacteria to produce biofilms. In vivo studies and a larger number of samples, in addition to molecular techniques for evaluating biofilm formation and antimicrobial resistance, would be necessary to determine the degree of pathogenicity of microorganisms isolated from artisanal Minas fresh cheeses produced and sold in the Federal District. This research reflects the attention that should be given to improving sanitary conditions in dairy farming and dairy production facilities, where good hygiene practices by producers and employees of farms and local businesses and fairs are more necessary.Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária (FAV)Programa de Pós-Graduação em Saúde AnimalPerecmanis, SimoneOliveira, Yonara Silva Garcia de2024-12-27T16:24:26Z2024-12-27T16:24:26Z2024-12-272024-06-30info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfOLIVEIRA, Yonara Silva Garcia de. Formação de biofilme e outros fatores patogênicos de S. Aureus e demais bactérias cocos gram-positivas isoladas de queijos minas frescal artesanalmente produzidos e comercializados no DF. 2024. 47 f., il Dissertação (Mestrado em Saúde Animal) — Universidade de Brasília, Brasília, 2024.http://repositorio.unb.br/handle/10482/51274porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-12-27T16:25:52Zoai:repositorio.unb.br:10482/51274Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-12-27T16:25:52Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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