Identificação, caracterização molecular e virulência de Cronobacter spp. e outros micro-organismos patogênicos em alimentos infantis desidratados

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2020
Autor(a) principal: Carvalho, Gabriela Guimarães, 1987-
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: [s.n.]
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Enterobacter sakazakii (Cronobacter spp.)
Alimentos para bebês
Virulência
Baby foods
Virulence
Link de acesso: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1640758
Resumo: Orientador: Dirce Yorika Kabuki
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spelling Identificação, caracterização molecular e virulência de Cronobacter spp. e outros micro-organismos patogênicos em alimentos infantis desidratadosIdentification, molecular characterization and virulence of Cronobacter spp. and other pathogenic microorganisms in dehydrated infant foodsEnterobacter sakazakii (Cronobacter spp.)Alimentos para bebêsVirulênciaEnterobacter sakazakii (Cronobacter spp.)Baby foodsVirulenceOrientador: Dirce Yorika KabukiTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de AlimentosResumo: Com a impossibilidade do aleitamento materno em diversos casos houve o favorecimento do mercado de alimentos em relação ao desenvolvimento de produtos para a nutrição infantil. Atualmente existem diversos tipos de alimentos infantis, desde fórmulas com compostos hidrolisados, fórmulas para situações especiais, como por exemplo, intolerância à lactose, ou alguma alergia, até os diversos tipos de cereais infantis, sendo os mais encontrados de arroz, milho, aveia e outros. Porém, as fórmulas infantis desidratadas têm sido identificadas como veículo de contaminação microbiológica que pode causar infecções e doenças, e nos casos mais graves levar a morte, principalmente na população de risco, estando nesse grupo as crianças com idade inferior a 1 ano, idosos e pessoas imunodeprimidas. A contaminação microbiana nos alimentos infantis desidratados pode ocorrer durante o processo de fabricação, pós-processamento e/ou durante a reconstituição. Muitos micro-organismos patogênicos já foram isolados de alimentos infantis, o que faz com que esses alimentos possam representar um risco para a saúde dos recém-nascidos e crianças. Assim, o objetivo desta tese foi verificar a presença de bactérias patogênicas em fórmulas infantis e de seguimento desidratadas e cereais infantis desidratados e analisar o potencial patogênico dos isolados. Foi realizado o isolamento e a identificação de possíveis micro-organismos patogênicos presentes nos alimentos infantis (Salmonella sp., Cronobacter spp., Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli) e a contagem de micro-organismos mesófilos aeróbios. Os isolados de Cronobacter spp. foram identificados por reação em cadeia da polimerase (PCR) e Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF/MS). O perfil de patogenicidade foi avaliado através da capacidade de invasão e permanência em macrófagos. A susceptibilidade antibiótica dos isolados foi testada através do método de disco-difusão. Foram analisadas a presença dos genes de virulência ompA, ompX, cpa, sodA e a capacidade de utilização de ácido siálico nos isolados de Cronobacter spp. O perfil de Sequence Type (ST) dos isolados de Cronobacter spp. foi obtido através do Multilocus Sequencing Typing (MLST). Do total de 152 amostras analisadas e de todos os micro-organismos testados, foi encontrado apenas contaminação por Cronobacter spp. nos cereais infantis (17,3%; 13/75), sendo C. sakazakii, a espécie identificada pela PCR. A técnica de MALDI-TOF/MS foi capaz de identificar Cronobacter com maior eficiência ao nível de gênero, sendo controverso a identificação de espécies quando comparado com os resultados da PCR. Alguns dos isolados de Cronobacter spp. apresentaram resistência a cefazolina (94,5%; 70/74), amoxicilina (9,45%; 7/74), cefpodoxime (6,75%; 5/74), colistina (2,70%; 2/74), streptomicina (1,35%; 1/74) e trimetropim/sulfametoxazol (1,35%; 1/74), e 4,05% (3/74) apresentaram multirresistência. Em relação aos genes de virulência, todos os isolados apresentaram os genes testados. Todos os isolados analisados foram capazes de invadir e permanecer em macrófagos J774, porém com o decorrer do tempo (72h) foi observado uma diminuição na contagem de bactérias no interior dos macrófagos. Apenas 2 isolados não foram capazes de se multiplicar na presença de ácido siálico, mostrando 95,2% dos isolados têm a habilidade de usar esse ácido como fonte de carbono. Os isolados apresentaram 10 sequence types (STs) distintos, sendo o ST40 o mais encontrado. Esses resultados mostram que a contaminação por Cronobacter spp. em alimentos destinados à alimentação infantil representa um risco importante a saúde dessa populaçãoAbstract: The development of products for infant nutrition in the food market is favored by the impossibility of breastfeeding in several cases. Currently, there are several types of baby foods, from formulas with hydrolyzed compounds, formulas for special situations such as lactose intolerance, or allergy, to various types of infant cereals, the most commons being rice, corn, and oats. However, the dehydrated infant formulas have been identified as a vehicle of microbiological contamination that can cause disease, and in severe cases can cause the death, especially in the at-risk population, which includes children under the age of 1 year, and immunosuppressed people. Microbial contamination in dehydrated baby foods can occur during the manufacturing process, post-processing, or during reconstitution. Many pathogenic microorganisms had already been isolated from baby foods, making these foods a risk to the health of newborns and children. Thus, the objective of this work is to verify the presence of pathogenic bacteria in infant formulas, follow-up formulas, and dehydrated infant cereals and to analyze the pathogenic potential of the isolates. Isolation and identification of possible pathogenic microorganisms present in infant foods (Salmonella sp., Cronobacter spp., Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli) as well as aerobic mesophilic microorganisms count were performed. The isolates of Cronobacter spp. were identified by using Polymerase Chain Reaction (PCR) and Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight/Mass Spectrometry (MALDI-TOF/MS). Their pathogenicity profile was assessed through the invasion capacity in macrophages. The antibiotic susceptibility of the isolates was tested by the disk diffusion method. The presence of the virulence genes ompA, ompX, cpa, sodA, and the ability to use sialic acid in Cronobacter spp. isolates were analyzed. The sequence type profile of Cronobacter spp. was obtained through Multilocus Sequencing Typing (MLST). One hundred and fifty-two samples were tested for all microorganisms previously cited, and only contamination by Cronobacter spp. was found in infant cereals (17.3%; 13/75), and C. sakazakii was the identified species by PCR. The MALDI-TOF/MS technique was able to identify Cronobacter spp. at the genus level more efficiently than PCR. However, the identification of species by MALDI-TOF/MS was controversial when compared with the PCR results. Some isolates showed resistance to cefazolin (94.5%; 70/74), amoxicillin (9.45%; 7/74), cefpodoxime (6.75%; 5/74), colistin (2.70%; 2/74), streptomycin (1.35%; 1/74) and trimethoprim/sulfamethoxazole (1.35%; 1/74) and 4.05% (3/74) of the isolates showed multiresistance. Moreover, all isolates presented the virulence genes tested. All analyzed isolates were able to invade and remain in J774 macrophages, however, over time (72h), a decrease in the count of bacteria within the macrophages was observed. Only 2 isolates were not able to multiply in the presence of the sialic acid, showing that 95.2% of the isolates have the ability of using this acid as carbon source. The isolates presented 10 distinct sequence types (STs), and ST40 was the most found. These results show that contamination by Cronobacter spp. in foods intended for infant feeding represent an important risk to the health of this populationDoutoradoCiência de AlimentosDoutora em Ciência de AlimentosFAPESP2016/14107-0CAPES0010[s.n.]Kabuki, Dirce Yorika, 1964-Rocha, Liliana de OliveiraLevy, Carlos EmilioPinto, Uelinton ManoelBrandão, Marcelo Luiz LimaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Engenharia de AlimentosPrograma de Pós-Graduação em Ciência de AlimentosUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASCarvalho, Gabriela Guimarães, 1987-20202020-12-16T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online ( 123 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1640758CARVALHO, Gabriela Guimarães. Identificação, caracterização molecular e virulência de Cronobacter spp. e outros micro-organismos patogênicos em alimentos infantis desidratados . 2020. 1 recurso online ( 123 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1640758. 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