Avaliação de proteínas sintéticas para construção de biossensores para o diagnóstico da criptococose

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2025
Autor(a) principal: Erbereli, Camila Regina, 1988-
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: [s.n.]
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Cryptococcus
Biossensores
Ressonância de plasmon de superfície
Biosensors
Surface plasmon resonance
Link de acesso: https://hdl.handle.net/20.500.12733/31253
Resumo: Orientadores: Lauro Tatsuo Kubota, Dênio Emanuel Pires Souto
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spelling Avaliação de proteínas sintéticas para construção de biossensores para o diagnóstico da criptococoseEvaluation of synthetic proteins for cryptococcosis diagnosis biosensorsCryptococcusBiossensoresRessonância de plasmon de superfícieCryptococcusBiosensorsSurface plasmon resonanceOrientadores: Lauro Tatsuo Kubota, Dênio Emanuel Pires SoutoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), stituto de QuímicaResumo: A criptococose é uma micose que afeta seres humanos e animais em todo o mundo. Ao atingir indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana HIV, a probabilidade de óbito é bastante elevada. O maior número de casos clínicos é proveniente das espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. De Serpa Brandão et al. (2014), desenvolveram um estudo com o intuito de testar peptídeos sintéticos derivados de proteínas imunorreativas de Cryptococcus como novos antígenos para imunodiagnóstico da criptococose. Assim, o objetivo deste trabalho foi criar um método de diagnóstico por meio do estudo da afinidade de diferentes proteínas, denominadas A, B, C e D, frente a anticorpos específicos da doença por meio da técnica de Ressonância de Plásmons de Superfície (SPR). As proteínas foram imobilizadas na superfície do disco de ouro (chip sensor de SPR) para possibilitar a interação com os anticorpos. Para imobilização eficiente das proteínas, realizou-se a modificação do chip sensor através da formação de uma monocamada auto-organizada do ácido mercaptopropiônico, seguida pela ativação dos grupos carboxílicos terminais com EDC-NHS, imobilização das proteínas (separadamente) e, posteriormente, o bloqueio dos sítios de ligação não-específicos com etanolamina. As interações de amostra de soro de pacientes portadores da doença criptococose e de pacientes saudáveis com as proteínas A, B e C foram investigadas através da variação do ângulo SPR, e os resultados demonstraram uma maior imunorreatividade das proteínas frente aos anticorpos presentes em pacientes portadores da doença. Foi evidenciado que para as proteínas A e B, a partir de um grau de diluição de soro igual a 1:400, foi possível obter um diagnóstico confiável da criptococose. Para a proteína C, o grau de diluição do soro que confirma o diagnóstico da doença foi de 1:200. Os resultados conferem com aqueles obtidos através do método de ELISA. Para a proteína D, uma vez que dentre as demais proteínas apresentou os melhores resultados durante as etapas de otimização para a construção do sensor, os testes de interação se deram primeiramente com um anticorpo purificado específico anti-Cryptococcus via SPR, em que se observou uma resposta linear entre as concentrações de 0,5 e 20 ug mL-1, com limite de detecção de 0,14 ug mL-1 e limite de quantificação de 0,48 ug mL-1. Posteriormente ensaios com amostras de soro de um grupo controle e portadores da doença criptococose foram realizados. As amostras reais anti-Cryptococcus foram quantificadas e os resultados mostraram-se satisfatórios, indicando que o sensor é viável e pode contribuir para um diagnóstico confiável da doença em questãoAbstract: Cryptococcosis is a fungal infection that affects humans and animals worldwide. Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii are the fungal species most commonly associated with clinical cases of the disease. When these fungi infect individuals with human immunodeficiency virus (HIV), the probability of death is considerably high, taking the necessity of developing reliable clinical diagnosis. A study developed by De Serpa Brandão et al. (2014) evaluated synthetic peptides derived from immunoreactive proteins of Cryptococcus as novel antigens for the Cryptococcosis diagnosis. From the findings of De Serpa Brandão et al. (2014), the objective of the present work is the developing of a diagnostic platform (Biosensor) by studying the affinity of the synthetic peptides as antigen, using Surface Plasmon Resonance (SPR) technique. Different peptides, called A, B, C and D, were immobilized on the gold disk surface (SPR sensor chip) and were tested for antibodies specific to Cryptococcosis. Prior to this, the SPR sensor chip was modified by a self-assembled monolayer of mercaptopropionic acid, followed by the activation of terminal carboxyl groups with EDC-NHS. Afterwards, the immobilization of each these synthetic peptides and, the blocking of non-specific binding sites with ethanolamine. It was investigated by changing the SPR angle, the interactions of serum samples from patients with Cryptococcosis and healthy patients with proteins A, B and C. The results demonstrated higher immunoreactivity of the proteins against the antibodies present in patients with the disease. Proteins A and B obtained a reliable diagnosis at a serum dilution rate of 1:400. For protein C, the serum dilution rate that confirmed the diagnosis of the disease was 1:200. The results obtained in this study corroborated with the ELISA method reported in Serpa’s work. Compared to the other peptides, the peptide D was also investigated by changing the SPR angle, and the results demonstrated better performance in the optimization stages for sensor building. Interaction tests were first performed with a specific purified anti-Cryptococcus antibody, in which a linear response was observed between concentrations of 0.5 and 20 µg mL-1, with a limit of detection (LOD) of 0.14 µg mL-1 and limit of quantification (LOQ) of 0.48 µg mL-1. Subsequently, tests with serum samples from a control group and patients with cryptococcosis were performed. The real anti-Cryptococcus samples were quantified, and the results were significantly or highly satisfactory, indicating that the peptide-SPR sensor can be a powerful platform to reliable diagnosis of the Cryptococcosis diseaseAbertoDoutoradoQuímica AnalíticaDoutora em CiênciasCAPES001[s.n.]Kubota, Lauro Tatsuo, 1964-2024Souto, Dênio Emanuel Pires, 1985-Soares, Frederico Luis FelipeJanegitz, Bruno CamposJesus, Dosil Pereira deUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de QuímicaPrograma de Pós-Graduação em QuímicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASErbereli, Camila Regina, 1988-20252025-02-24T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (96 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/31253ERBERELI, Camila Regina. Avaliação de proteínas sintéticas para construção de biossensores para o diagnóstico da criptococose. 2025. 1 recurso online (96 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), stituto de Química, Campinas, SP. Disponível em: 20.500.12733/31253. Acesso em: 29 set. 2025.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1500247Cover: https://repositorio.unicamp.br/capa/capa?codigo=1500247porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2025-09-19T17:33:02Zoai::1500247Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2025-09-19T17:33:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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