Manutenção em linhagens de camundongos e infecção in vitro de uma cepa de Cryptosporidium sp de origem humana

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2007
Autor(a) principal: Britto, Maria Helena Seabra Soares de
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: [s.n.]
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Cryptosporidium
Camundongo
Cultura in vitro
Mice
In vitro cultivation
Link de acesso: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1606797
Resumo: Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo
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spelling Manutenção em linhagens de camundongos e infecção in vitro de uma cepa de Cryptosporidium sp de origem humanaCryptosporidium sp MMC/Uni human strain : maintenance in mice and in MDBK cellsCryptosporidiumCamundongoCultura in vitroMiceIn vitro cultivationOrientador: Ana Maria Aparecida GuaraldoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O gênero Cryptosporidium compreende atualmente 16 espécies, que já foram encontradas parasitando mais de 150 espécies animais, incluindo o homem, no qual já foram referidas infecções causadas por sete delas. O Cryptosporidium parvum é o mais estudado porque é responsabilizado pelo caráter zoonótico da infecção. A espécie responsável pelo caráter antroponótico da criptosporidiose é o Cryptosporidium hominis. Embora já tenha sido descoberto há cem anos e mesmo com o avanço da genômica e biologia molecular, ainda existem muitas dúvidas sobre sua taxonomia, biologia e relação com seus variados hospedeiros. Dados na literatura apontam para a necessidade urgente da definição de modelos experimentais para cultivo de linhagens do parasito ¿in vivo¿ e ¿in vitro¿. As pesquisas ¿in vivo¿ esbarram na dificuldade da utilização de grande número de animais certificados do ponto de vista genético e sanitário e mantidos em ambientes controlados. Por outro lado, os métodos de cultivo ¿in vitro¿ têm-se mostrado de difícil reprodutibilidade, pois a grande variabilidade de linhagens celulares, com diferentes origens, cultivadas em diferentes meios, em condições ambientais diversas, tornam bastante controversos os resultados obtidos nessa área. Neste trabalho apresentamos o cultivo de uma cepa de origem humana de Cryptosporidium sp, de um único paciente portador de HIV/aids, com criptosporidiose, denominada de MMC/Uni, mantida pela infecção por tubagem intra-gástrica de 105 oocistos em camundongos neonatos livres de patógenos específicos (SPF) de linhagens, heterogênicas e isogênicas imunocompetentes e imunodeficientes , mantidos durante todo o experimento em isolador de PVC flexível. Oocistos da cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp foram purificados mediante gradiente de sacarose. Após excistação, foram cultivados em monocamadas da linhagem celular MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney). A presença de merontes foi constatada após 90 horas de cultivo. A cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp, de origem humana, permaneceu infectante após 16 meses, sob refrigeração a 4°C, em solução de Dicromato de Potássio a 2,5% e manteve a infectividade de camundongos após 10 meses de congelamento em DMSO a - 70ºCAbstract: Cryptosporidium covers actually 16 species, that have been found infecting more then 150 animal species, including humans, in wich have already been reported infections caused by seven of them. Cryptosporidium parvum is the most studied, due to be responsible by the zoonotic character of the infection. The specie responsible by the anthroponotic character of the criptosporidiosis is Cryptosporidium hominis. Although it has been discovered a hundred years ago, and even with the advances in genomics and molecular biology, still persists many doubts about its taxonomy, biology and the relations with its many different hosts. Data in literature point toward the urgent need in the definition of experimental models to cultivate strains of the parasite ¿in vivo¿ and ¿in vitro¿. The research ¿in vivo¿ faces the difficulty in the use of a great number of certificated animals, in the point of genetic and sanitary view, kept in controlled environment. In the other hand, ¿in vitro¿ culture methods have shown to be of difficult reproductibility, for the great variability of the cellular strains, with different origins, kept in different breeding media, in diverse environmental conditions, turn out of great controversy the results found in this area. Here we present a strain of Cryptosporidium sp, from human origin, taken from an unique HIV/aids patient with criptosporidiosis, named as MMC/Uni, kept by a intragastric tubage infection of 105 oocysts in Specific Pathogen-Free (SPF) neonates from outbred and inbred immunocompetent or immunodeficient mice strains, kept during the entire experiment in an isolator of flexible PVC. Oocists of MMC/Uni strain of Cryptosporidium sp were purified by sucrose gradient. After excistation, they were cultivated in MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) cells monolayers. The presence of meronts was observed after 90 hours of cultivation. The strain MMC/Uni of Cryptosporidium sp, from human origin, remained infectant after 16 months, under refrigeration at 4°C, in a 2.5% solution of Potassium Dichromate, and maintened infectiveness in mouse, after 10 months of freezing in DMSO at -70ºCDoutoradoDoutor em Parasitologia[s.n.]Guaraldo, Ana Maria Aparecida, 1951-2015Alves, Delma PegoloFranco, Regina Maura BuenoGatti, Maria Silvia ViccariTamashiro, Wirla Maria da Silva CunhaUniversidade Estadual de Campinas. Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em ParasitologiaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASBritto, Maria Helena Seabra Soares de20072007-05-09T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf130. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1606797BRITTO, Maria Helena Seabra Soares de. Manutenção em linhagens de camundongos e infecção in vitro de uma cepa de Cryptosporidium sp de origem humana. 2007. 130. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1606797. Acesso em: 25 abr. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/422298porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T05:08:54Zoai::422298Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T05:08:54Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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